[发明专利]一种基于荧光标记定量PCR技术的地中海贫血基因检测方法

摘要

本发明公开了一种基于荧光标记定量PCR技术的地中海贫血基因检测方法，主要包括以下步骤：先设计一条通用荧光标记引物，再针对检测位点设计扩增引用，在设计扩增引物时，将扩增引物对的其中一条引物进行加尾，加尾序列与通用荧光标记引物序列一致，在进行PCR反应时，将加尾的引物组与通用荧光标记引物进行混合，从而实现对扩增产物的荧光标记。PCR反应结束后，将PCR产物放入测序仪，利用测序仪的Genemapper功能，通过结果中已知分子量的一系列内参来确认不同PCR产物的长度，从而对检测样本的基因型进行判断。采用本发明所述方法可实现单管对α地中海贫血的不同基因型的检测。

主权项

一种基于荧光标记定量PCR技术的地中海贫血基因检测方法，其特征在于包括以下步骤：(一)引物设计(1)设计一条通用引物，该引物与人类基因组没有同源性，对该通用引物进行荧光标记即得通用荧光标记引物；(2)针对检测位点，设计一系列基于跨越断点式PCR扩增引物对、位点特异性PCR扩增引物对或可用于基因片段定量的扩增引物对，包括正向引物和反向引物；(3)对上述设计的基于跨越断点式PCR扩增引物对、位点特异性PCR扩增引物对和可用于基因片段定量的扩增引物对的其中一条引物进行加尾，加尾序列与通用荧光标记引物序列一致，组成新的加尾引物组；(二)PCR检测取待检测DNA、各加尾引物组、通用荧光标记引物，与热启动DNA聚合酶体系组成25μl或50μl的反应体系，其中各成分在体系中的浓度为：待检测DNA1～3ng/μl，各加尾引物的浓度均为0.3～0.5μmol/L，通用荧光标记引物0.7～0.9μmol/L；PCR反应条件为：预变性95℃11分钟，循环程序为95℃30秒，59～62℃30秒，72℃30秒，共25～35个循环，最后72℃20分钟延伸；(三)结果检测取PCR产物0.3～0.75μl，混合测序系统的HiDi，以及分子量标记，进行结果检测。