[发明专利]高效液相色谱法测定蜂胶中Artepillin C含量的方法

摘要

本发明涉及一种高效液相色谱法测定蜂胶中ArtepillinC含量的方法。目前还没有一种简单、快速、准确的该类方法。本发明包括样品处理工序、标准曲线制作工序和样液测定工序；样品处理工序中，称取蜂胶样品0.5g，加入20ml甲醇，甲醇定容至50ml，吸取上清液1-2mL，用80%的磷酸甲醇液定容至50ml，得到样液；标准曲线制作工序中，以y表示液相色谱图中ArtepillinC所对应的峰面积A，x表示ArtepillinC的浓度Cmg/mL，求得标准溶液的回归方程为y=ax+b；样液测定工序中，采用液相色谱仪对样液进行测定。本发明简单，快速，准确，检测成本低，节约人力，检测时间短，效率高。

主权项

一种高效液相色谱法测定蜂胶中Artepillin C含量的方法，其特征在于：该方法包括样品处理工序、标准曲线制作工序和样液测定工序；所述样品处理工序中，称取粉碎均匀的蜂胶样品0.5g，加入20ml甲醇，超声溶解20min，冷却后，再用甲醇定容至50ml，混匀，静置10min，吸取上清液1‑2mL，用体积百分含量为80%的磷酸甲醇液定容至50ml，混匀，过滤，去掉5mL初滤液，取1mL续滤液过0.22µm滤膜，得到样液；所述标准曲线制作工序包括标准溶液制备步骤、标准溶液测定步骤和标准曲线制作步骤，所述标准溶液制备步骤中，称取Artepillin C标准品5mg，用甲醇定容至10mL，配成浓度为0.5mg/mL的贮备标准溶液；取贮备标准溶液200μL，加入1800μL体积百分含量为80%的磷酸甲醇液稀释，混匀后得到浓度为0.05mg/mL的中间标准液；取中间标准液10μL、20μL、40μL、100μL、200μL、400μL和1000μL，分别用990μL、980μL、960μL、900μL、800μL、600μL和0μL体积百分含量为80%的磷酸甲醇液混匀，从而配制成Artepillin C浓度分别为0.0005mg/mL的一号标准溶液、0.001mg/mL的二号标准溶液、0.002mg/mL的三号标准溶液、0.005mg/mL的四号标准溶液、0.01mg/mL的五号标准溶液、0.02mg/mL的六号标准溶液和0.05mg/mL的七号标准溶液；所述标准溶液测定步骤中，采用液相色谱仪来进行测定，液相色谱仪的柱温为30℃，检测波长为320nm，进样量为5μL，流动相中的A为甲醇、B为体积百分含量0.4%的磷酸；采用液相色谱仪分别对一号标准溶液、二号标准溶液、三号标准溶液、四号标准溶液、五号标准溶液、六号标准溶液和七号标准溶液进行测定，分别得到对应的液相色谱图；所述标准曲线制作步骤中，以y表示液相色谱图中Artepillin C所对应的峰面积A，x表示Artepillin C的浓度C mg/mL，求得标准溶液的回归方程为y=ax+b，其中，a和b均为实数；所述样液测定工序中，采用液相色谱仪对样液进行测定，液相色谱仪的柱温为30℃，检测波长为320nm，进样量为5μL，流动相中的A为甲醇、B为体积百分含量0.4%的磷酸；采用液相色谱仪对样液进行测定后，得到样液的液相色谱图，根据样液的液相色谱图中Artepillin C所对应的峰面积，结合标准溶液的回归方程y=ax+b，得到样液中Artepillin C的浓度值。