[发明专利]高效液相色谱法测定蜂胶中Artepillin C含量的方法

权利要求书

1.一种高效液相色谱法测定蜂胶中Artepillin C含量的方法，其特征在于：该方法包括样品处理工序、标准曲线制作工序和样液测定工序；

所述样品处理工序中，称取粉碎均匀的蜂胶样品0.5g，加入20ml甲醇，超声溶解20min，冷却后，再用甲醇定容至50ml，混匀，静置10min，吸取上清液1-2mL，用体积百分含量为80%的磷酸甲醇液定容至50ml，混匀，过滤，去掉5mL初滤液，取1mL续滤液过0.22μm滤膜，得到样液；

所述标准曲线制作工序包括标准溶液制备步骤、标准溶液测定步骤和标准曲线制作步骤，所述标准溶液制备步骤中，称取Artepillin C标准品5mg，用甲醇定容至10mL，配成浓度为0.5mg/mL的贮备标准溶液；取贮备标准溶液200μL，加入1800μL体积百分含量为80%的磷酸甲醇液稀释，混匀后得到浓度为0.05mg/mL的中间标准液；取中间标准液10μL、20μL、40μL、100μL、200μL、400μL和1000μL，分别用990μL、980μL、960μL、900μL、800μL、600μL和0μL体积百分含量为80%的磷酸甲醇液混匀，从而配制成Artepillin C浓度分别为0.0005mg/mL的一号标准溶液、0.001mg/mL的二号标准溶液、0.002mg/mL的三号标准溶液、0.005mg/mL的四号标准溶液、0.01mg/mL的五号标准溶液、0.02mg/mL的六号标准溶液和0.05mg/mL的七号标准溶液；所述标准溶液测定步骤中，采用液相色谱仪来进行测定，液相色谱仪的柱温为30℃，检测波长为320nm，进样量为5μL，流动相中的A为甲醇、B为体积百分含量0.4%的磷酸；采用液相色谱仪分别对一号标准溶液、二号标准溶液、三号标准溶液、四号标准溶液、五号标准溶液、六号标准溶液和七号标准溶液进行测定，分别得到对应的液相色谱图；所述标准曲线制作步骤中，以y表示液相色谱图中Artepillin C所对应的峰面积A，x表示Artepillin C的浓度C mg/mL，求得标准溶液的回归方程为y=ax+b，其中，a和b均为实数；

所述样液测定工序中，采用液相色谱仪对样液进行测定，液相色谱仪的柱温为30℃，检测波长为320nm，进样量为5μL，流动相中的A为甲醇、B为体积百分含量0.4%的磷酸；采用液相色谱仪对样液进行测定后，得到样液的液相色谱图，根据样液的液相色谱图中Artepillin C所对应的峰面积，结合标准溶液的回归方程y=ax+b，得到样液中Artepillin C的浓度值。

2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定蜂胶中Artepillin C含量的方法，其特征在于：所述液相色谱仪中的色谱柱为Hypersil、Venusil MP、Shim-pack VP和Intersil中的一种。

3.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定蜂胶中Artepillin C含量的方法，其特征在于：所述标准溶液的回归方程为y=2.11578e+007x-475，相关系数为1.0000。

4.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定蜂胶中Artepillin C含量的方法，其特征在于：采用液相色谱仪对样液进行测定时，采用梯度洗脱的方法对目标物质进行分离。

5.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定蜂胶中Artepillin C含量的方法，其特征在于：所述液相色谱仪为岛津LC-20A高效液相色谱仪，且配有二元泵、在线脱气机、自动进样器和LC-Solution数据处理软件。

6.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定蜂胶中Artepillin C含量的方法，其特征在于：所述样品处理工序中，在吸取上清液时，蜂胶样品若为中国蜂胶，则吸取的上清液为2mL；蜂胶样品若为巴西绿蜂胶，则吸取的上清液为1mL。

7.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定蜂胶中Artepillin C含量的方法，其特征在于：所述样品处理工序中，用体积百分含量为80%的磷酸甲醇液将上清液定容至50ml，混匀后，采用定性滤纸进行过滤。