[发明专利]一种胎盘源母体间充质干细胞的制备方法有效

专利信息
申请号: 201310196516.3 申请日: 2013-05-24
公开(公告)号: CN103451150A 公开(公告)日: 2013-12-18
发明(设计)人: 韩之海;王涛 申请(专利权)人: 北京汉氏联合生物技术有限公司
主分类号: C12N5/0775 分类号: C12N5/0775;A61K35/50;A61P37/00
代理公司: 北京国帆知识产权代理事务所(普通合伙) 11334 代理人: 李增朝
地址: 100176 北京市大兴区北京经*** 国省代码: 北京;11
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摘要: 发明提供了一种胎盘源母体间充质干细胞的制备方法,包括以下步骤:(1)胎盘源母体间充质干细胞的分离;和(2)胎盘源母体间充质干细胞的培养。其中,步骤(1)使用了trypLETM酶溶液分两步处理胎盘组织;步骤(2)使用无血清培养基。本发明的方法经过短串联重复序列(STR)图谱分析为完全母体来源,经染色体核型检查,细菌、真菌和病毒的病原微生物检查,细胞纯度鉴定,细胞生物学功能鉴定为合格。因此,本发明方法获得的胎盘源母体间充质干细胞不含异种蛋白,可以满足临床使用的需要,尤其适合母亲自己使用,也为建立优良的胎盘源母体间充质干细胞库提供了技术保障。
搜索关键词: 一种 胎盘 母体 间充质 干细胞 制备 方法
【主权项】:
一种胎盘源母体间充质干细胞的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)胎盘源母体间充质干细胞的分离:取胎盘组织,先用机械方法处理成组织块小片,用trypLETM酶溶液37℃消化组织块,清洗去除消化液后,再用trypLETM酶溶液37℃消化组织块,得到消化后的消化液,过滤后将细胞悬液离心,即获得胎盘源母体间充质干细胞;(2)胎盘源母体间充质干细胞的培养:将上述步骤(1)获得的细胞按0.5‑2×104/cm2的密度接种到培养瓶中,置于37℃、饱和湿度、5%的CO2培养箱中进行原代细胞培养,细胞培养到80‑90%融合时,用trypLETM消化,按分种率1:2‑‑1:10接种到新培养瓶中培养;经过数次传代后,将细胞作为原代传代细胞库,冻存到液氮中长期保存。
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