[发明专利]一种胎盘源母体间充质干细胞的制备方法

权利要求书

1.一种胎盘源母体间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）胎盘源母体间充质干细胞的分离：取胎盘组织，先用机械方法处理成组织块小片，用trypLE^TM酶溶液37℃消化组织块，清洗去除消化液后，再用trypLE^TM酶溶液37℃消化组织块，得到消化后的消化液，过滤后将细胞悬液离心，即获得胎盘源母体间充质干细胞；

（2）胎盘源母体间充质干细胞的培养：将上述步骤（1）获得的细胞按0.5-2×10⁴/cm²的密度接种到培养瓶中，置于37℃、饱和湿度、5%的CO2培养箱中进行原代细胞培养，细胞培养到80-90%融合时，用trypLE^TM消化，按分种率1：2--1：10接种到新培养瓶中培养；经过数次传代后，将细胞作为原代传代细胞库，冻存到液氮中长期保存。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中胎盘组织为来自母体的底蜕膜部分。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中使用机械方法获得组织块小片的大小为小于0.5-1平方厘米。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中第一次用trypLE^TM酶溶液37℃消化组织块的处理时间为0.3-0.5小时；第二次用trypLE^TM酶溶液37℃消化组织块的处理时间为0.5-1小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中过滤方法为滤网过滤。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述滤网的目数为100目-200目。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中细胞培养所用培养基为无血清培养基。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中传代次数为1-5代。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中冻存所用的冻存保护液含5-10%的DMSO和1-10%的人血清白蛋白和适量DMEM/F12，也可以使用商业化的冻存保护液。

10.一种如权利要求1-9任意一项所述的方法获得的胎盘源母体间充质干细胞。

11.根据权利要求10所述的胎盘源母体间充质干细胞，其特征在于，所述的胎盘源母体间充质干细胞经过短串联重复序列（STR）图谱分析为母体来源；经染色体核型检查，细菌、真菌和病毒的病原微生物检查，细胞纯度鉴定，细胞生物学功能鉴定为合格。

12.如权利要求1-9任意一项所述的方法获得的胎盘源母体间充质干细胞在组织工程、制备治疗免疫系统疾病的药物以及组织再生修复中的应用。