[发明专利]一种从猪皮中提取I型胶原的方法

摘要

本发明公开了一种从猪皮中提取I型胶原的方法，该方法首先将新鲜猪皮在‑20℃以下冷冻后切片，切片厚度小于1mm，采用匀浆法将猪皮制成匀浆，使用有机溶解萃取后在40.5±1℃条件下进行酶解以去除非I型胶原，根据不同类型胶原的热稳定性差异进行选择性酶解，离心法去除酶解后的多肽，收集不溶性的固体，多次洗涤，干燥后获得猪皮I型胶原。制备的猪I型胶原纯度超过99%且保持三螺旋的天然结构。该方法具有操作简单，制备出的I型胶原纯度高和随机降解率低等优点。

主权项

一种从猪皮中提取I型胶原的方法，其特征在于提取方法包括以下步骤：(1)称重：取新鲜的猪皮，准确称重，其重量作为后续处理步骤的计量依据；(2)清洗：使用2‑3倍猪皮重量的清水在常温下将新鲜的猪皮直接清洗，去除附着物；(3)冷冻：将猪皮在‑20℃以下冷冻24‑36小时；(4)切片：使用刀具在猪皮平面的垂直方向上将猪皮切成片状，切片厚度小于1mm；(5)打浆：向猪皮切片中加入2‑4倍重量的清水，均匀悬浮后将其冷冻到0‑4℃，使用匀浆机或胶体磨将切片后的猪皮处理成浆状；(6)第一次萃取：向匀浆中加入1‑2倍匀浆液体积的正己烷、氯仿或石油醚，在室温下震荡2‑4小时，将其转移到分液器中萃取，收集水溶液；(7)第二次萃取：向步骤(6)收集的水溶液总加入1‑2倍匀浆液体积的正己烷、氯仿或石油醚，在室温下震荡2‑4小时，将其转移到分液器中萃取，收集水溶液；(8)过滤：使用孔径为5微米的微滤膜过滤水溶液，收集透过液；(9)加盐：向步骤(8)获得的透过液中加入NaCl，控制NaCl的浓度为0.2‑1.0mol/L，加入磷酸氢二钠调节pH至7.5‑8.5；(10)控温：将步骤(9)获得的溶液温度准确控制在40.5+1℃；(11)酶解：向步骤(10)溶液中加1/50‑1/20倍猪皮重量的碱性蛋白酶，在40.5+1℃条件下酶解16‑24小时，以去除非I型胶原；(12)离心：将酶解后的溶液在12000‑16000r/m条件下离心，收集沉淀物；(13)洗涤：使用2‑4倍沉淀物重量的去离子水将步骤(12)获得的沉淀物悬浮，离心后收集沉淀物，重复上述过程两次；(14)干燥：将洗涤后的沉淀物在‑20℃冷冻，置于冷冻干燥机内干燥，干燥后的粉末即为I型胶原蛋白。