[发明专利]一种从猪皮中提取I型胶原的方法有效
| 申请号： | 201310173789.6 | 申请日： | 2013-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN103215334B | 公开（公告）日： | 2017-05-17 |
| 发明（设计）人： | 王云松;吴士龙 | 申请（专利权）人： | 河北考力森生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K14/78;C07K1/14 |
| 代理公司： | 中国商标专利事务所有限公司11234 | 代理人： | 曾海艳 |
| 地址： | 057450 河北省邱县经济*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 猪皮 提取 胶原 方法 | ||
1.一种从猪皮中提取I型胶原的方法，其特征在于提取方法包括以下步骤：
(1)称重：取新鲜的猪皮，准确称重，其重量作为后续处理步骤的计量依据；
(2)清洗：使用2-3倍猪皮重量的清水在常温下将新鲜的猪皮直接清洗，去除附着物；
(3)冷冻：将猪皮在-20℃以下冷冻24-36小时；
(4)切片：使用刀具在猪皮平面的垂直方向上将猪皮切成片状，切片厚度小于1mm；
(5)打浆：向猪皮切片中加入2-4倍重量的清水，均匀悬浮后将其冷冻到0-4℃，使用匀浆机或胶体磨将切片后的猪皮处理成浆状；
(6)第一次萃取：向匀浆中加入1-2倍匀浆液体积的正己烷、氯仿或石油醚，在室温下震荡2-4小时，将其转移到分液器中萃取，收集水溶液；
(7)第二次萃取：向步骤(6)收集的水溶液总加入1-2倍匀浆液体积的正己烷、氯仿或石油醚，在室温下震荡2-4小时，将其转移到分液器中萃取，收集水溶液；
(8)过滤：使用孔径为5微米的微滤膜过滤水溶液，收集透过液；
(9)加盐：向步骤(8)获得的透过液中加入NaCl，控制NaCl的浓度为0.2-1.0mol/L，加入磷酸氢二钠调节pH至7.5-8.5；
(10)控温：将步骤(9)获得的溶液温度准确控制在40.5+1℃；
(11)酶解：向步骤(10)溶液中加1/50-1/20倍猪皮重量的碱性蛋白酶，在40.5+1℃条件下酶解16-24小时，以去除非I型胶原；
(12)离心：将酶解后的溶液在12000-16000r/m条件下离心，收集沉淀物；
(13)洗涤：使用2-4倍沉淀物重量的去离子水将步骤(12)获得的沉淀物悬浮，离心后收集沉淀物，重复上述过程两次；
(14)干燥：将洗涤后的沉淀物在-20℃冷冻，置于冷冻干燥机内干燥，干燥后的粉末即为I型胶原蛋白。
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