[发明专利]孕妇外周血中胎儿DNA的提取方法有效
| 申请号： | 201310133487.6 | 申请日： | 2013-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN103205416A | 公开（公告）日： | 2013-07-17 |
| 发明（设计）人： | 吴超群;管丽 | 申请（专利权）人： | 邯郸市康业生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 石家庄国为知识产权事务所 13120 | 代理人： | 夏素霞 |
| 地址： | 056107 河北省*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种孕妇外周血中胎儿DNA的提取方法，属于分离提取DNA技术领域。其包括下述步骤：（1）采集孕妇外周血，加入EDTA抗凝，离心；（2）加入蛋白酶复合剂，离心；（3）加入Tris饱和酚混匀，离心；（4）加入氯仿/异戊醇混合液充分混匀,离心；（5）加入乙醇充分混匀，高速离心，取得DNA沉淀；（6）制备得到胎儿DNA粗回收液；（7）得到DNA提取液。本发明采用蛋白酶复合剂将蛋白质降解为小肽或氨基酸，从而实现DNA与蛋白质高效分离，提取液中胎儿DNA占总DNA的90%以上，能够满足胎儿遗传病产前筛查的需要，为开展非侵入性胎儿遗传病产前筛查提供必要的技术保障。 | ||
| 搜索关键词： | 孕妇 外周血中 胎儿 dna 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种孕妇外周血中胎儿DNA的提取方法，其特征在于其包括下述步骤：（1）采集孕妇外周血5‑10mL，加入EDTA抗凝，4℃下1200‑1700g离心5‑10分钟，吸取上清液；（2）在步骤（1）所得上清液中加入蛋白酶复合剂，4℃下1200‑1700g离心5‑10分钟，吸取上层水相；（3）在步骤（2）所得上层水相中加入Tris饱和酚混匀，4 ℃下4000‑4600g离心25‑35分钟，吸取上层清液；（4）在步骤（3）所得上层清液中加入氯仿/异戊醇混合液充分混匀, 4℃下4000‑4600g，离心5‑10 分钟，吸取上层水溶液；（5）在步骤（4）所得上层水溶液中加入体积浓度为95 %的乙醇充分混匀，4 ℃下7000‑9000g高速离心5‑10 分钟，取得DNA沉淀；（6）加20‑100mL TE溶解DNA沉淀，TE溶解的DNA溶液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色，选择切取目的条带固定，得到胎儿DNA粗回收液；（7）胎儿DNA粗回收液用100‑200mL无水乙醇沉淀DNA, 20‑100mL TE溶解DNA沉淀，得到DNA提取液。
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