[发明专利]一种制备艾卡拉肽的方法

摘要

本发明涉及制备艾卡拉肽的固相‑液相全合成方法，所述方法收率高且后处理方便，为艾卡拉肽的工业规模生产提供了一种新的思路。

主权项

一种制备艾卡拉肽的方法，包括下述步骤：(1)以2‑CTC树脂为载体分别合成以下肽树脂：肽树脂1，即Fmoc‑Gly‑CTC树脂；肽树脂2，即Fmoc‑Arg(Pbf)‑CTC树脂；肽树脂3，即Fmoc‑Pro‑CTC树脂；肽树脂4，即Fmoc‑Ala‑CTC树脂；然后采用固相多肽合成方法，将肽树脂1从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到Fmoc‑Gln(Trt)‑Cys(Acm)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Phe‑Ile‑Tyr(tBu)‑Gly‑CTC树脂，再经裂解液裂解得到多肽片段A：Fmoc‑Gln(Trt)‑Cys(Acm)‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Phe‑Ile‑Tyr(tBu)‑Gly‑OH；将肽树脂2从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到Fmoc‑Arg(Pbf)‑Trp(Boc)‑Phe‑Phe‑Asn(Trt)‑Ile‑Phe‑Thr(tBu)‑Arg(Pbf)‑CTC树脂，再经裂解液裂解得到多肽片段B：Fmoc‑Arg(Pbf)‑Trp(Boc)‑Phe‑Phe‑Asn(Trt)‑Ile‑Phe‑Thr(tBu)‑Arg(Pbf)‑OH；将肽树脂3从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到Fmoc‑Pro‑Cys(Acm)‑Arg(Pbf)‑Ala‑Ala‑His(Trt)‑Pro‑CTC树脂，再经裂解液裂解得到多肽片段C：Fmoc‑Pro‑Cys(Acm)‑Arg(Pbf)‑Ala‑Ala‑His(Trt)‑Pro‑OH；将肽树脂1从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到Fmoc‑Phe‑Lys(Boc)‑Ala‑Asp(OtBu)‑Asp(OtBu)‑Gly‑CTC树脂，再经裂解液裂解得到多肽片段D：Fmoc‑Phe‑Lys(Boc)‑Ala‑Asp(OtBu)‑Asp(OtBu)‑Gly‑OH；将肽树脂4从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到Fmoc‑Glu(OtBu)‑Ala‑Met‑His(Trt)‑Ser(tBu)‑Phe‑Cys(Acm)‑Ala‑CTC树脂，再经裂解液裂解得到多肽片段E：Fmoc‑Glu(OtBu)‑Ala‑Met‑His(Trt)‑Ser(tBu)‑Phe‑Cys(Acm)‑Ala‑OH；(2)以王树脂为载体合成Fmoc‑Asp(OtBu)‑王树脂，然后采用固相多肽合成方法将其从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到肽树脂F，其中带Fmoc保护基的氨基酸依次为Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH、Fmoc‑Thr(tBu)‑OH、Fmoc‑Cys(Acm)‑OH、Fmoc‑Met‑OH、Fmoc‑Lys(Boc)‑OH、Fmoc‑Lys(Boc)‑OH、Fmoc‑Cys(Acm)‑OH、Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Leu‑OH、Fmoc‑Ser(tBu)‑OH、Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Phe‑OH、Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH、Fmoc‑Asn(Trt)‑OH、Fmoc‑Gln(Trt)‑OH、Fmoc‑Asn(Trt)‑OH、Fmoc‑Gly‑OH、Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Cys(Acm)‑OH和Fmoc‑Gly‑OH；(3)采用固相多肽合成方法，从C端到N端使肽树脂F依次与步骤(1)中带保护基的多肽片段A、B、C、D、E偶联，即从C端到N端F连接A，A再连接B，B再连接C，C再连接D，D再连接E，得到艾卡拉肽线性肽树脂；(4)对步骤(3)中的艾卡拉肽线性肽树脂进行裂解，得到包含六个‑Cys(Acm)‑片段的艾卡拉肽线性肽；(5)脱除步骤(4)的产物中‑Cys(Acm)‑片段上的Acm保护基，得到艾卡拉肽线性肽；(6)采用合适的氧化体系使步骤(5)的艾卡拉肽线性肽形成三对二硫键，得到艾卡拉肽，所述氧化体系为由谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽组成的缓冲液。