[发明专利]一种制备艾卡拉肽的方法

权利要求书

1.一种制备艾卡拉肽的方法，包括下述步骤：

(1)以2-CTC树脂为载体分别合成以下肽树脂：肽树脂1，即Fmoc-Gly-CTC树脂；肽树脂2，即Fmoc-Arg(Pbf)-CTC树脂；肽树脂3，即Fmoc-Pro-CTC树脂；肽树脂4，即Fmoc-Ala-CTC树脂；然后采用固相多肽合成方法，将肽树脂1从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到Fmoc-Gln(Trt)-Cys(Acm)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Tyr(tBu)-Gly-CTC树脂，再经裂解液裂解得到多肽片段A：Fmoc-Gln(Trt)-Cys(Acm)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Tyr(tBu)-Gly-OH；将肽树脂2从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Phe-Phe-Asn(Trt)-Ile-Phe-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-CTC树脂，再经裂解液裂解得到多肽片段B：Fmoc-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Phe-Phe-Asn(Trt)-Ile-Phe-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-OH；将肽树脂3从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到Fmoc-Pro-Cys(Acm)-Arg(Pbf)-Ala-Ala-His(Trt)-Pro-CTC树脂，再经裂解液裂解得到多肽片段C：Fmoc-Pro-Cys(Acm)-Arg(Pbf)-Ala-Ala-His(Trt)-Pro-OH；将肽树脂1从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到Fmoc-Phe-Lys(Boc)-Ala-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Gly-CTC树脂，再经裂解液裂解得到多肽片段D：Fmoc-Phe-Lys(Boc)-Ala-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Gly-OH；将肽树脂4从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Ala-Met-His(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Cys(Acm)-Ala-CTC树脂，再经裂解液裂解得到多肽片段E：Fmoc-Glu(OtBu)-Ala-Met-His(Trt)-Ser(tBu)-Phe-Cys(Acm)-Ala-OH；

(2)以王树脂为载体合成Fmoc-Asp(OtBu)-王树脂，然后采用固相多肽合成方法将其从C端到N端逐一偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到肽树脂F，其中带Fmoc保护基的氨基酸依次为Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH和Fmoc-Gly-OH；

(3)采用固相多肽合成方法，从C端到N端使肽树脂F依次与步骤(1)中带保护基的多肽片段A、B、C、D、E偶联，即从C端到N端F连接A，A再连接B，B再连接C，C再连接D，D再连接E，得到艾卡拉肽线性肽树脂；

(4)对步骤(3)中的艾卡拉肽线性肽树脂进行裂解，得到包含六个-Cys(Acm)-片段的艾卡拉肽线性肽；

(5)脱除步骤(4)的产物中-Cys(Acm)-片段上的Acm保护基，得到艾卡拉肽线性肽；

(6)采用合适的氧化体系使步骤(5)的艾卡拉肽线性肽形成三对二硫键，得到艾卡拉肽，所述氧化体系为由谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽组成的缓冲液。

2.权利要求1的方法，其中，在步骤(1)中肽树脂1、肽树脂2、肽树脂3和肽树脂4的合成在碱性条件下进行，所述碱为DIPEA或TMP；CTC树脂的替代度为0.5-1.0mmol/g；在步骤(2)中的王树脂的替代度为0.1-0.2mmol/g。

3.权利要求2的方法，其中所述碱为DIPEA。

4.权利要求2的方法，其中在步骤(1)中CTC树脂的替代度为0.7mmol/g。