[发明专利]猪瘟活疫苗中病毒含量测定方法及猪瘟病毒兔化弱毒核酸探针试剂盒

摘要

本发明涉及建立一种猪瘟活疫苗中病毒含量测定方法及猪瘟病毒兔化弱毒核酸探针试剂盒。本发明采用PCR法制备HCLV特异性地高辛标记的DNA探针，同时将HCLV疫苗梯度稀释后接种于24孔培养板上的ST细胞中，在培养7天后分别从接种各稀释度的不同孔细胞中提取RNA后，用RT-PCR结合斑点杂交的方法检测病毒感染。应用该方法能很好的对疫苗病毒实施以TCID50为单位的准确定量，多次重复实验发现对同一批次疫苗间定量的重复性好，相互结果相差不大（5.3×104TCID50/头份、3.0×104TCID50/头份、3.0×104TCID50/头份）。本发明技术方案的实验结果表明RT-PCR结合斑点杂交定量方法能准确、完全的对疫苗HCLV定量，值得推广应用。

主权项

一种猪瘟活疫苗中病毒含量测定的方法，其特征在于：（1）是以HCLV‑E2基因片段质粒为模板，用序列1和序列2所述序列的引物HCLV‑F1/HCLV‑R1进行扩增，采用地高辛标记技术将扩增产物制备成地高辛标记HCLV‑E2DNA探针；（2）以从24孔培养板上的被不同稀释度猪瘟活疫苗感染的ST细胞提取的RNA为模板用序列3和序列4所述序列的一对引物HCLV‑F2/HCLV‑R2进行RT‑PCR；（3）通过斑点杂交，根据在硝酸纤维膜点样后的显色，狄高辛标记的特异性核酸探针可检测经猪瘟活疫苗感染的ST细胞中猪瘟兔化弱毒病毒的特异性核酸的RT‑PCR产物存在；（4）根据不同稀释度样本在硝酸纤维膜点样后的显色反应，计算疫苗中以TCID50/头份为单位的猪瘟兔化弱毒病毒的含量。