[发明专利]猪瘟活疫苗中病毒含量测定方法及猪瘟病毒兔化弱毒核酸探针试剂盒

权利要求书

1.一种猪瘟活疫苗中病毒含量测定的方法，其特征在于：

（1）是以HCLV-E2基因片段质粒为模板，用序列1和序列2所述序列的引物HCLV-F1/HCLV-R1进行扩增，采用地高辛标记技术将扩增产物制备成地高辛标记HCLV-E2DNA探针；

（2）以从24孔培养板上的被不同稀释度猪瘟活疫苗感染的ST细胞提取的RNA为模板用序列3和序列4所述序列的一对引物HCLV-F2/HCLV-R2进行RT-PCR；

（3）通过斑点杂交，根据在硝酸纤维膜点样后的显色，狄高辛标记的特异性核酸探针可检测经猪瘟活疫苗感染的ST细胞中猪瘟兔化弱毒病毒的特异性核酸的RT-PCR产物存在；

（4）根据不同稀释度样本在硝酸纤维膜点样后的显色反应，计算疫苗中以TCID₅₀/头份为单位的猪瘟兔化弱毒病毒的含量。

2.如权利要求1所述一种猪瘟活疫苗中病毒含量测定的方法的应用，其特征在于用该方法测定的以TCID₅₀/头份为单位的猪瘟兔化弱毒病毒定量结果作为猪瘟活疫苗效价检验的质量标准。

3.一种实施权利要求1猪瘟病毒兔化弱毒株病毒含量测定的猪瘟病毒兔化弱毒特异性核酸探针试剂盒，其特征在于该试剂盒含有：

（1）经狄高辛标记的HCLV-E2DNA探针；

（2）未感染的正常ST细胞提取RNA的RT-PCR产物做为阴性对照和猪瘟兔化弱毒病毒感染的ST细胞提取RNA的RT-PCR产物做为阳性对照；

（3）用于样品RNA扩增的一对特异性引物，其序列如序列3、序列4所示；

（4）硝酸纤维膜、封闭试剂、NCPI溶液、NBT溶液和20×SSC溶液。

4.如权利要求3所述一种猪瘟兔化弱毒特异性核酸探针试剂盒的应用，其特征在于该试剂盒可用于猪瘟活疫苗成品检验中的效价检验。

5.如权利要求3所述一种猪瘟兔化弱毒特异性核酸探针试剂盒的应用，其特征在于该试剂盒可用于猪瘟病毒的检测和流行病学调查。