[发明专利]一种鸭乙型肝炎病毒的荧光定量PCR检测方法及试剂有效
| 申请号： | 201310046253.8 | 申请日： | 2013-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN103114153A | 公开（公告）日： | 2013-05-22 |
| 发明（设计）人： | 王亚文;李义平;刘正稳;惠凌云;刘希;冯艾;王威;张琳;杨广笑;王全颖 | 申请（专利权）人： | 西安交通大学医学院第一附属医院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 汪人和 |
| 地址： | 710061 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种鸭乙型肝炎病毒的荧光定量PCR检测方法及试剂，筛选出鸭乙肝病毒Core区最大一致性的保守区核酸序列，以此为模板，设计、合成引物和荧光探针。构建pGEM-T/DHBV Core重组质粒，制备PCR标准品。通过优化反应体系和扩增条件。本发明提供的实时荧光定量PCR检测方法具有通用性强、灵敏度高、特异性强、重复性好等优点，适于不同地区、不同鸭种的DHBV DNA的检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 乙型肝炎 病毒 荧光 定量 pcr 检测 方法 试剂 | ||
【主权项】：
一种鸭乙型肝炎病毒的荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括以下操作：1）以包含DHBV Core基因片段的质粒载体作为标准品，以鸭血清中提取到的DNA为待检品；分别以标准品和待检品为模板，在包含上游扩增引物、下游扩增引物和连接有荧光标记物的检测探针的扩增体系中进行扩增；所述的上游引物为：ggactcgaac ctagaaga；所述的下游扩增引物为：ttatttccta ggcgaggg；所述的检测探针为：accacagttg tctatgggag aag；2）在扩增结束后，分别采集标准品和待检品的扩增产物荧光标记物的荧光信号；3）根据标准品的扩增产物的荧光信号与质粒载体的对应关系建立标准曲线，然后根据待检品的荧光信号在标准曲线上的位置，确定待检品中鸭乙型肝炎病毒的含量。
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