[发明专利]一种利用生物反应器制备猪圆环病毒2型灭活疫苗的方法

摘要

本发明涉及一种利用生物反应器制备猪圆环病毒2型灭活疫苗的方法，所述的生物反应器为激流式生物反应器，通过灌注袋和激流袋形成循环系统，灌注袋内置有细胞培养袋，细胞培养袋内有纸片载体，所述的方法包括以下步骤：培养PK-15细胞；接种猪圆环病毒2型；培养猪圆环病毒2型，取病毒维持液测糖耗，糖耗下降时收获病毒液；制成猪圆环病毒2型灭活疫苗。本发明通过激流式生物反应器制备猪圆环病毒2型灭活疫苗，生产用地小，劳动强度低，生产成本相对较低；操作简单，能达到全自动微电脑控制；批间差异小，产品质量高且稳定；生产的猪圆环病毒2型灭活疫苗安全性好、免疫效力高，副作用小，对猪圆环2型病毒强毒攻击具有较好的免疫保护作用。

主权项

一种利用生物反应器制备猪圆环病毒2型灭活疫苗的方法，所述的生物反应器为激流式生物反应器，通过灌注袋和激流袋形成循环系统，灌注袋内置有细胞培养袋，细胞培养袋内有纸片载体，其特征在于：所述的制备猪圆环病毒2型灭活疫苗的方法包括以下步骤：1）在已灭菌的激流式生物反应器中培养PK‑15细胞，细胞接种量为2‑5×109个PK‑15细胞，在培养条件为pH值7.2‑7.4、温度36.8‑37.5℃及溶氧DO60%‑90%的条件下，以激流式生物反应器的循环速度450‑500mL/min、振荡器转速50‑60rpm，培养PK‑15细胞至纸片载体上形成致密的单层，弃去细胞生长液；2）加入病毒维持液，接种猪圆环病毒2型，病毒接种量为生物反应器工作体积的5%，在培养条件为pH值7.4‑7.6、温度36.5‑37℃及溶氧DO60‑90%的条件下，以激流式生物反应器的循环速度450‑500mL/min和振荡器转速50‑60rpm培养猪圆环病毒2型；3）培养猪圆环病毒2型72‑120h后，每隔6‑12h取病毒维持液测糖耗，糖耗下降时收获病毒液，‑15℃以下冷冻保存；4）制成猪圆环病毒2型灭活疫苗。