[发明专利]一种利用生物反应器制备猪圆环病毒2型灭活疫苗的方法

权利要求书

1.一种利用生物反应器制备猪圆环病毒2型灭活疫苗的方法，所述的生物反应器为激流式生物反应器，通过灌注袋和激流袋形成循环系统，灌注袋内置有细胞培养袋，细胞培养袋内有纸片载体，其特征在于：所述的制备猪圆环病毒2型灭活疫苗的方法包括以下步骤：

1）在已灭菌的激流式生物反应器中培养PK-15细胞，细胞接种量为2-5×10⁹个PK-15细胞，在培养条件为pH值7.2-7.4、温度36.8-37.5℃及溶氧DO60%-90%的条件下，以激流式生物反应器的循环速度450-500mL/min、振荡器转速50-60rpm，培养PK-15细胞至纸片载体上形成致密的单层，弃去细胞生长液；

2）加入病毒维持液，接种猪圆环病毒2型，病毒接种量为生物反应器工作体积的5%，在培养条件为pH值7.4-7.6、温度36.5-37℃及溶氧DO60-90%的条件下，以激流式生物反应器的循环速度450-500mL/min和振荡器转速50-60rpm培养猪圆环病毒2型；

3）培养猪圆环病毒2型72-120h后，每隔6-12h取病毒维持液测糖耗，糖耗下降时收获病毒液，-15℃以下冷冻保存；

4）制成猪圆环病毒2型灭活疫苗。

2.根据权利要求1所述的一种利用生物反应器制备猪圆环病毒2型灭活疫苗的方法，其特征在于：所述生物反应器的培养采用灌注培养的方式，维持细胞生长液或病毒维持液的体积不变。

3.根据权利要求1所述的一种利用生物反应器制备猪圆环病毒2型灭活疫苗的方法，其特征在于：所述的纸片载体密度为15-20g/L。

4.根据权利要求1所述的一种利用生物反应器制备猪圆环病毒2型灭活疫苗的方法，其特征在于：所述的细胞生长液为含体积浓度为8-10%小牛血清的MEM粉剂细胞培养基，病毒维持液为含体积浓度为1-2%小牛血清的MEM粉剂细胞培养基。