[发明专利]一种非生物学筛选抗病毒中药有效成分的方法

摘要

本发明公开了一种非生物学筛选抗病毒中药有效成分的方法。该方法以流感病毒的特效药物奥司他韦（OS）为模板分子，以丙烯酰胺和4-乙烯基吡啶为功能单体，合成非共价的奥司他韦分子印迹聚合物（OS-MIP），以此为固定相湿法装填液相色谱柱，对中草药及复方的有效成分群进行亲和筛选，通过质谱鉴定有亲和性的化合物成分，再通过体外的抗病毒实验对化合物的活性进行验证，从中药中发现和模板分子具有相同抗流感病毒活性的化合物。本发明可被借鉴用于筛选鉴定其他活性的化合物，从而缩短药物实体的筛选过程，加快替代药物的研发过程，特别是在非生物学药物筛选方法中具有重要的实际意义和广阔的应用前景。

主权项

一种非生物学筛选抗病毒中药有效成分的方法，其步骤包括：a. 奥司他韦分子印迹聚合物及其液相色谱柱的制备以0.1 mmol奥司他韦为模板分子、0.69 mmol功能单体、5 mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂、30%丙烯酰胺和70% 4‑乙烯基吡啶作为功能单体、甲苯作为致孔剂、15 mg偶氮二异丁腈作为引发剂，60 ℃油浴热引发聚合反应，所得质地坚硬的白色块状聚合物，对其进行研磨筛分，收集粒径在25～45 µm之间的颗粒，在索氏提取器中，采用甲醇‑乙酸，甲醇‑乙酸体积比为90 : 10，对其进行洗脱，以除去模板分子奥司他韦；50 ℃减压干燥，在2000 psi的压力下，湿法装填150 mm × 4.6 mm的液相色谱柱，将该色谱柱接入色谱仪，以合适的流动相对其进行洗脱、平衡，直至出现较为平稳的基线；b. 奥司他韦分子印迹液相色谱柱（OSMIP‑LC）对OS和其他化合物的亲和分离液相色谱条件：Agilent 1200 LC，OS‑MIP自制150 mm × 4.6 mm, 25‑45 µm液相色谱柱，柱温30℃；流动相为甲醇‑乙腈‑甲酸，甲醇 : 乙腈 : 甲酸体积比为75 : 25 : 0.01，流速为0.075 ml/min，数据采集软件为MassHunter，压力约170 bar；质谱条件：Agilent 6410A QQQ电喷雾串联四级杆质谱仪，喷雾器压力30 psi，毛细管电压+4000 V，N₂流速10 L/min，温度350 ℃，采集周期为200 ms，模式Scan；c. 基于奥司他韦分子印迹聚合物与液相色谱、质谱联用，分离筛选鉴定与模板分子活性相似的抗病毒中药有效成分。