[发明专利]表征组合物中的RNA的方法和试剂盒

摘要

本发明涉及确定组合物中核糖核酸的序列和/或量的方法，所述方法包括以下步骤：i.提供包含一种或多种核糖核酸分子(RNA)的组合物，ii.使一种或多种两部分核酸杂交探针与所述一种或多种RNA杂交，其中各探针包括：a.带有3’-尾部的第一核酸分子，其中所述尾部不与所述组合物中的RNA杂交，b.带有5’-尾部的第二核酸分子，其中所述尾部不与所述组合物中的RNA杂交，c.其中如果所述第一核酸分子和所述第二核酸分子与它们的靶RNA杂交以及当其与所述靶RNA杂交时，所述第一核酸分子和所述第二核酸分子位于一个单链RNA分子上彼此隔开2～1000个核苷酸，iii.将所述第一核酸分子的杂交的5’-尾部共价链接到所述第二核酸的杂交的3’-尾部，其中所述链接通过逆转录和随后的连接反应完成，将RNA-DNA杂合体与双链体特异性抗体结合，iv.用对所述第一核酸分子的所述第一3’-尾部和所述第二核酸分子的所述第二5’-尾部具有特异性的引物扩增链接的分子，和v.借助于新一代测序对扩增产物进行测序。所述试剂盒包含引物、抗体和连接酶或逆转录酶。

主权项

确定组合物中核糖核酸的序列和/或量的方法，所述方法包括以下步骤：i.提供包含一种或多种核糖核酸分子(RNA)的组合物，ii.使一种或多种两部分核酸杂交探针与所述一种或多种RNA杂交，其中各探针包括：a.带有3’‑尾部的第一核酸分子(DNA)，其中所述尾部不与所述组合物中的RNA杂交，b.带有5’‑尾部的第二核酸分子(DNA)，其中所述尾部不与所述组合物中的RNA杂交，c.其中如果所述第一核酸分子和所述第二核酸分子与它们的靶RNA杂交以及当其与所述靶RNA杂交时，所述第一核酸分子和所述第二核酸分子位于一个单链RNA分子上彼此隔开2～1000个核苷酸，iii.将杂交的第一核酸分子共价链接到杂交的第二核酸，其中所述链接通过逆转录和随后的连接反应完成，iv.用对所述第一核酸分子的所述第一3’‑尾部和所述第二核酸分子的所述第二5’‑尾部具有特异性的引物扩增链接的分子，v.对扩增产物进行测序，其中，在扩增步骤(iv)之前，vi.分离步骤(iii)的链接的分子与靶RNA的杂合体，所述分离通过特异性针对DNA/RNA杂合体的抗体来捕集所述杂合体。