[发明专利]通过互补测序识别抗生素靶标的方法有效
| 申请号： | 201280033334.8 | 申请日： | 2012-05-03 |
| 公开（公告）号： | CN103703134B | 公开（公告）日： | 2017-06-16 |
| 发明（设计）人： | 戴维·休·威廉斯;阿瑟·基思·特纳 | 申请（专利权）人： | 迪斯库瓦有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京康信知识产权代理有限责任公司11240 | 代理人： | 余刚,张英 |
| 地址： | 英国*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 披露了一种用于识别在细菌内作为抗生素靶标的必需基因的方法，该方法包括步骤（a）通过包括在所述抗生素的存在下对生长进行选择以产生抗生素抗性突变株克隆的步骤的方法产生所述细菌的抗生素抗性突变株（AbR突变株）；（b）用（i）所述细菌的一个或多个必需基因；以及（ii）插入时使细菌DNA失活的转座子转化AbR突变株，以产生对于所述一个或多个必需基因是局部二倍体的转座子突变株的库；（c）在不同量的所述抗生素的存在下，使来自局部二倍体库的细菌生长以产生两种以上的测试培养物；以及（d）比较测试培养物之间的转座子插入的分布以识别在所述细菌内作为所述抗生素的靶标的推定必需基因。 | ||
| 搜索关键词： | 通过 互补 识别 抗生素 靶标 方法 | ||
【主权项】：
一种用于识别在细菌内作为抗生素靶标的必需基因的方法，所述方法包括步骤：(a)通过包括在所述抗生素的存在下对生长进行选择以产生抗生素抗性突变株克隆的方法产生所述细菌的抗生素抗性突变株，将其命名为AbR突变株；(b)用以下来转化所述AbR突变株：(i)所述细菌的所述必需基因的野生型拷贝，以产生具有野生型拷贝和其AbR突变株拷贝的局部二倍体；以及(ii)插入时使细菌DNA失活的转座子，以产生对于所述必需基因来说是杂合的局部二倍体的转座子突变株的库；(c)在不同量的所述抗生素的存在下，使来自所述杂合的局部二倍体的转座子突变株的库的细菌生长以产生两种以上的测试培养物，其中进入作为抗生素靶标的所述必需基因的转座子插入存在于非选择性的所述抗生素的量下，即当必需基因的野生型拷贝与其插入失活的AbR突变株拷贝互补时，而不是在选择性的所述抗生素的量下，即当必需基因的野生型拷贝与其插入失活的突变拷贝不互补时；以及(d)比较测试培养物之间的转座子插入的分布以识别在所述细菌内作为所述抗生素的靶标的推定必需基因。
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