[发明专利]基于探针的核酸检测

摘要

本发明提供了用于通过以下检测靶核苷酸序列的方法用核苷酸标签将核苷酸序列加标签，提供包含调节序列和核苷酸标签识别序列的具有解链温度Tm1的探针寡核苷酸；在多核苷酸扩增反应中将探针寡核苷酸掺入加标签的多核苷酸，提供包含与调节序列至少部分互补的序列区段的具有解链温度Tm2的调节寡核苷酸，使用探针寡核苷酸作为引物在PCR扩增反应中扩增加标签的靶核酸序列，并检测该扩增产物；其中Tm1和Tm2高于与多核苷酸扩增反应相关的退火温度。

主权项

一种用于检测靶核苷酸序列的方法，所述方法包含：a)用核苷酸标签序列将所述靶核苷酸序列加标签，从而制备加标签的靶核酸序列；b)提供包含与所述核苷酸标签序列互补的核苷酸标签识别序列和在所述核苷酸标签识别序列的5'的调节序列的探针寡核苷酸，其中所述调节序列不与所述核苷酸标签序列杂交，且其中所述探针寡核苷酸包含第一标记物并具有解链温度Tm1；c)使用所述探针寡核苷酸作为引物在PCR扩增反应中扩增所述加标签的靶核酸序列，其中所述PCR扩增反应由退火温度Ta表征；其中在包含与所述调节序列互补的序列区段的调节寡核苷酸的存在下实施所述PCR扩增反应，其中所述调节寡核苷酸不与所述核苷酸标签识别序列杂交，且其中所述调节寡核苷酸包含第二标记物并具有解链温度Tm2；和d)检测所述PCR扩增反应的产物；其中所述第一标记物和所述第二标记物构成荧光报告物/猝灭剂对；且其中Tm1和Tm2二者都高于Ta。