[发明专利]一种中华蜜蜂抗菌肽AccRoyalisin多克隆抗体的制备方法及用途

摘要

本发明公开了一种中华蜜蜂抗菌肽AccRoyalisin多克隆抗体的制备方法及用途。以大肠杆菌重组表达的中华蜜蜂王浆抗菌肽AccRoyalisin为抗原，免疫大白兔制备的多克隆抗体，该抗体效价大于40000倍；以此多克隆抗体为一抗，以重组表达的GST-AccRoyalisin为标准蛋白抗原作倍比稀释，用酶标仪通过Elisa法检测不同浓度GST-AccRoyalisin蛋白样品的吸光度，建立吸光度与MRJP1蛋白浓度的标准曲线。将不同蜂种或不同蜂群的血淋巴、蜂王浆冻干粉稀释后作为抗原，采用Elisa法检测得到样品的吸光度，代入所建立的标准曲线，计算得到样品的Royalisin的含量。本发明为Royalisin抗体提供了一种新的用途，为养蜂领域蜂中和蜂群抗病力的评价、抗病蜂群的选育，为蜂王浆防腐抗菌性能的评价提供了一种快捷的定性定量检测新方法。

主权项

一种蜂王浆王浆抗菌肽AccRoyalisin抗体的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）以含中华蜜蜂王浆抗菌肽AccRoyalisin 基因的该蜂头部cDNA为模板, 用PCR 方法扩增出其前体片段, 并克隆入含GST编码基因的表达载体pGEX‑ 4T‑ 2 中，将筛选获得的重组pGEX‑4T‑2/ AccRoyalisin转化大肠杆菌BL21中与谷胱甘肽融合进行表达；用亲和分离方法纯化目标蛋白GST‑Acc Royalisin；（2）以纯化的GST‑AccRoyalisin作为抗原，免疫大白兔，取血清获得GST‑AccRoyalisin多克隆抗体。