[发明专利]一种中华蜜蜂抗菌肽AccRoyalisin多克隆抗体的制备方法及用途

权利要求书

1.一种蜂王浆王浆抗菌肽AccRoyalisin抗体的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）以含中华蜜蜂王浆抗菌肽AccRoyalisin 基因的该蜂头部cDNA为模板, 用PCR 方法扩增出其前体片段, 并克隆入含GST编码基因的表达载体pGEX- 4T- 2 中，将筛选获得的重组pGEX-4T-2/ AccRoyalisin转化大肠杆菌BL21中与谷胱甘肽融合进行表达；用亲和分离方法纯化目标蛋白GST-Acc Royalisin；

（2）以纯化的GST-AccRoyalisin作为抗原，免疫大白兔，取血清获得GST-AccRoyalisin多克隆抗体。

2.一种如权利要求1所述的方法制备的GST-AccRoyalisin多克隆抗体。

3.一种如权利要求2所述GST-AccRoyalisin多克隆抗体检测蜜蜂血淋巴中抗菌肽Royalisin含量的Elisa方法，其特征在于，

（1）以GST-AccRoyalisin多克隆抗体为一抗，以重组表达GST-AccRoyalisin为标准抗原蛋白作倍比稀释，用酶标仪通过Elisa法，检测不同浓度GST-AccRoyalisin蛋白样品的吸光度，建立吸光度与AccRoyalisin蛋白浓度的标准曲线；

（2）用中华蜜蜂和意大利蜜蜂血淋巴为抗原，以GST-AccRoyalisin多克隆抗体为一抗，采用Elisa法检测获得样品的吸光度，代入所建立的标准曲线，计算得到样品的Royalisin含量。

4.一种如权利要求3所述的Elisa方法应用于测定中华蜜蜂与意大利蜜蜂抗病菌能力的差异。

5.一种如权利要求2所述的GST-AccRoyalisin多克隆抗体用于检测蜂王浆中抗菌肽Royalisin含量的Elisa方法，其特征在于，

（1）以GST-AccRoyalisin多克隆抗体为一抗，以重组表达的GST-AccRoyalisin为标准抗原蛋白作倍比稀释，用酶标仪通过Elisa法，检测不同浓度GST-AccRoyalisin蛋白样品的吸光度，建立吸光度与AccRoyalisin蛋白浓度的标准曲线；

（2）用蜂王浆冻干粉蛋白抽提物为抗原，以GST-AccRoyalisin多克隆抗体为一抗，采用Elisa法检测获得样品吸光度，代入所建立的标准曲线，计算得到样品中的Royalisin的含量。

6.一种如权利要求5所述的Elisa方法应用于测定蜂皇浆防腐性能。