[发明专利]一种验证二硫键对木聚糖酶热稳定性影响的方法无效
| 申请号： | 201210562636.6 | 申请日： | 2012-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN102978224A | 公开（公告）日： | 2013-03-20 |
| 发明（设计）人： | 邬敏辰;余涛;殷欣;李剑芳 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N9/42;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
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| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提出了一种对来源于米曲霉Aspergillus oryzae的11家族的杂合木聚糖酶AEx11A进行耐热分析，通过对AEx11A结构的同源建模及其与AoXyn11A结构的比对，发现在AEx11A的N端引入了一个二硫键(Cys5-Cys32)。利用定点突变法将其5位的半胱氨酸突变为苏氨酸(C5T)，去除该二硫键，以探讨其对AEx11A热稳定性的影响，结果发现突变酶(AEx11AC5T)的Topt由突变前的75℃降为60℃、t1/270和t1/280分别由突变前的197和25min缩短为3.0和1.0min，说明N端二硫键对11家族木聚糖酶热稳定性有一定的影响。能为11家族木聚糖酶的热稳定机制的阐明、热稳定性蛋白工程的改造等奠定理论基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 验证 二硫键 聚糖 热稳定性 影响 方法 | ||
【主权项】：
一种对来源于米曲霉Aspergillus oryzae的11家族的杂合木聚糖酶AEx11A进行耐热分析。通过对AEx11A结构的同源建模及其与AoXyn11A结构的比对分析，定向突变以研究热稳定提高的原因，突变后的核苷酸(AEx11AC5T)序列为SEQ ID NO：1。
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