[发明专利]一种小麦胚芽脂肪酶的固定化方法

摘要

一种小麦胚芽脂肪酶的固定化方法，属于生物工程技术领域。本发明包括以下步骤：（1）用环氧氯丙烷活化载体，使载体带上环氧基；（2）用一种化合物将（1）中载体上的活化基团打开，载体带上连接基团；（3）将步骤（2）获得的载体通过连接物与小麦胚芽脂肪酶共价连接。本发明中固定化载体修饰和载体与酶共价结合条件温和，过程简单。通过该固定化方法大大提高了小麦胚芽脂肪酶的稳定性和重复利用次数，易于进行工业化生产。

主权项

一种小麦胚芽脂肪酶的固定化方法，其特征在于步骤为：（1）用环氧氯丙烷活化载体，活化时添加水溶性助溶剂，使载体带上环氧基；所述载体为硅胶、琼脂糖、壳聚糖、葡聚糖、聚乙二醇中的一种或几种的混合物；载体在使用前需经浓盐酸浸泡后，用大量去离子水洗涤，抽滤干燥后待用；所述水溶性助溶剂选用：二甲亚砜、N,N‑二甲基甲酰胺、二氧六环、乙腈、丙酮、正己烷中的一种或几种的混合物；环氧氯丙烷与载体的摩尔比为1‑20:1；助溶剂加入量占总体系体积的5%‑40%，环氧氯丙烷活化载体的温度为30‑50℃，活化时间为1‑8h； 载体与小麦胚芽脂肪酶的质量比为1‑100:1；（2）用一种带有氨基的化合物将步骤（1）已活化载体上的环氧基打开，使载体带上连接基团，即使环氧基在碱性条件下发生水解，形成氨基；所述带有氨基的化合物选用：氨水、1,2‑二氨基乙烷、3,3’‑二氨基二丙烷、1,6‑己二胺、6‑氨基己酸中的一种；氨基化合物与环氧基摩尔比为1‑100:1，氨基化温度为30‑50℃，控制反应pH为12‑14，控制转速为100‑200rpm；（3）步骤（2）获得的载体通过连接物与小麦胚芽脂肪酶共价连接；所述连接物为碳化二亚胺EDC、碳化二亚胺EDC与N‑羟基琥珀酰亚胺NHS混合物、碳化二亚胺EDC与N‑羟基硫代琥珀酰亚胺（Sulfo‑NHS）混合物中的一种；连接物与小麦胚芽脂肪酶的摩尔比为1‑100:1，交联温度为4‑25℃，交联的pH为5.0‑9.0，交联时间为2‑24h。