[发明专利]一种小麦胚芽脂肪酶的固定化方法

权利要求书

1.一种小麦胚芽脂肪酶的固定化方法，其特征在于步骤为：

（1）用环氧氯丙烷活化载体，活化时添加水溶性助溶剂，使载体带上环氧基；

所述载体为硅胶、琼脂糖、壳聚糖、葡聚糖、聚乙二醇中的一种或几种的混合物；载体在使用前需经浓盐酸浸泡后，用大量去离子水洗涤，抽滤干燥后待用；

所述水溶性助溶剂选用：二甲亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、二氧六环、乙腈、丙酮、正己烷中的一种或几种的混合物；环氧氯丙烷与载体的摩尔比为1-20:1；助溶剂加入量占总体系体积的5%-40%，环氧氯丙烷活化载体的温度为30-50℃，活化时间为1-8h； 

载体与小麦胚芽脂肪酶的质量比为1-100:1；

（2）用一种带有氨基的化合物将步骤（1）已活化载体上的环氧基打开，使载体带上连接基团，即使环氧基在碱性条件下发生水解，形成氨基；

所述带有氨基的化合物选用：氨水、1,2-二氨基乙烷、3,3^’-二氨基二丙烷、1,6-己二胺、6-氨基己酸中的一种；

氨基化合物与环氧基摩尔比为1-100:1，氨基化温度为30-50℃，控制反应pH为12-14，控制转速为100-200rpm；

（3）步骤（2）获得的载体通过连接物与小麦胚芽脂肪酶共价连接；

所述连接物为碳化二亚胺EDC、碳化二亚胺EDC与N-羟基琥珀酰亚胺NHS混合物、碳化二亚胺EDC与N-羟基硫代琥珀酰亚胺（Sulfo-NHS）混合物中的一种；

连接物与小麦胚芽脂肪酶的摩尔比为1-100:1，交联温度为4-25℃，交联的pH为5.0-9.0，交联时间为2-24h。

2.根据权利要求1所述的小麦胚芽脂肪酶的固定化方法，其特征在于步骤（1）中，选用的助溶剂为二甲亚砜，其效果最佳，助溶剂加入量占总体系体积的10%-15%；环氧氯丙烷活化载体温度为40℃；活化时间控制在2-4h。

3.根据权利要求1所述的小麦胚芽脂肪酶的固定化方法，其特征在于步骤（3）中，连接物与小麦胚芽脂肪酶的交联温度控制在4-10℃，pH控制在5-8。

4.一种固定化小麦胚芽脂肪酶，其特征在于，由权利要求1、2或3之一所述的小麦胚芽脂肪酶固定化方法制备而成。