[发明专利]一种重组猪流行性腹泻病毒乳酸乳球菌、其构建方法及应用

摘要

本发明公开一种重组猪流行性腹泻病毒乳酸乳球菌、其构建方法及应用，其制备步骤包括：RT-PCR扩增获得猪流行性腹泻病毒（PEDV）主要保护性抗原COE基因序列，并将其克隆测序。根据测序结果和表达载体特点，设计表达引物，扩增PEDV COE编码序列，并将其连接至乳酸乳球菌表达载体pNZ8149，电转化入乳酸乳球菌NZ3900细胞内从而获得重组菌。将重组菌以1ng/mL乳链菌肽（Nisin）诱导，通过SDS-PAGE和Western blot分析，PEDV主要S蛋白获得了表达。表达的重组PEDV乳酸菌载体口服疫苗能够刺激小鼠产生体液免疫和一定的细胞免疫，在制备猪流行性腹泻病毒疫苗等药物中具有广泛的应用前景。

主权项

一种重组猪流行性腹泻病毒乳酸乳球菌的构建方法，其特征在于，包括步骤有：①利用引物序列SEQ ID NO.1~2，对猪流行性腹泻病毒主要保护性抗原COE基因序列进行扩增，将扩增后的产物，连接至pMD 18‑T载体中；②以步骤①获得的重组载体为模板，利用引物序列SEQ ID NO.3~4进行PCR扩增，将PCR产物经Nco I与Sac I酶切、凝胶回收纯化后与经相同酶切、纯化后的载体pNZ8149连接；③将步骤②获得的重组质粒电转化入乳酸乳球菌NZ3900细胞内获得阳性重组菌。