[发明专利]一种重组猪流行性腹泻病毒乳酸乳球菌、其构建方法及应用

权利要求书

1.一种重组猪流行性腹泻病毒乳酸乳球菌的构建方法，其特征在于，包括步骤有：

①利用引物序列SEQ ID NO.1~2，对猪流行性腹泻病毒主要保护性抗原COE基因序列进行扩增，将扩增后的产物，连接至pMD 18-T载体中；

②以步骤①获得的重组载体为模板，利用引物序列SEQ ID NO.3~4进行PCR扩增，将PCR产物经Nco I与Sac I酶切、凝胶回收纯化后与经相同酶切、纯化后的载体pNZ8149连接；

③将步骤②获得的重组质粒电转化入乳酸乳球菌NZ3900细胞内获得阳性重组菌。

2.根据权利要求1所述的重组猪流行性腹泻病毒乳酸乳球菌的构建方法，其特征在于，所述的步骤①中，基因序列扩增条件为：94℃预变性5min,94℃变性1min,54℃退火1min,72℃延伸1min，共30个循环。

3.根据权利要求1所述的重组猪流行性腹泻病毒乳酸乳球菌的构建方法，其特征在于，所述的步骤②是指，用引物SEQ ID NO.3/4扩增含有COE的编码区片段，PCR产物经Nco I与Sac I酶切、凝胶回收纯化后与经相同酶切、纯化后的载体pNZ8149连接。

4.如权利要求1所述的方法构建的重组猪流行性腹泻病毒乳酸乳球菌。

5.一种重组猪流行性腹泻病毒乳酸乳球菌表达PEDV特异性抗体的方法，其特征在于，包括步骤有：将权利要求1方法获得的阳性重组菌，接种于L-SGM17B培养基中，30℃培养过夜，取过夜培养产物以1∶25比例接种于L-SGM17B培养基中，30℃培养至OD600达到0.4~0.6；用1ng/mL的乳链杆菌肽诱导2～3h。

6.如权利要求5所述的方法表达的PEDV特异性抗体在制备重组猪流行性腹泻病毒疫苗药物中的应用。