[发明专利]一种黄芩毛状根保藏和复壮方法

摘要

本发明公开了一种黄芩毛状根的保藏和复壮方法，属于植物细胞保藏技术领域，本发明的技术方案主要包括以下步骤：将经挑选的黄芩毛状根根尖部在液体培养基中避光培养至对数生长期；挑选经液体培养得到的黄芩毛状根，加入保藏培养基中，室温下，避光静置保藏；取保藏培养的黄芩毛状根，接种到活化培养基中，避光培养20～25d；取活化后的黄芩毛状根，接入复壮培养基，25～28℃避光培养15～20d。本发明提供的保藏和复壮方法成本低廉，操作简便，解决了液氮保藏专业性要求高、费用大和常规冷藏保藏操作过于繁琐的问题。

主权项

一种黄芩毛状根的保藏和复壮方法，其特征在于，包括以下步骤：1）挑选处于对数生长期的黄芩毛状根，接种入保藏培养基中，室温下，避光静置保藏；所述的保藏培养基pH为5.5～6.5，包括1～4g·L‑1蔗糖、0.5～2.0mg·L‑1甘氨酸、0.5～1.0mg·L‑1盐酸硫胺素、0.1～0.5mg·L‑1盐酸吡哆醇、0.1～1.0mg·L‑1烟酸和10～100mg·L‑1肌醇，以及无机盐部分；2）取保藏培养的黄芩毛状根，接种到活化培养基中，在25～28℃、避光震荡或摇瓶培养20～25天；所述的活化培养基pH为5.5～6.5，包括10～30g·L‑1蔗糖、100～500mg·L‑1水解乳蛋白、0.5～2.0mg·L‑1甘氨酸、0.5～1.0mg·L‑1盐酸硫胺素、0.1～0.5mg·L‑1盐酸吡哆醇、0.1～1.0mg·L‑1烟酸和10～100mg·L‑1肌醇，以及无机盐部分；3）取活化后的黄芩毛状根，接种入复壮培养基中，在25～28℃、避光震荡或摇瓶培养20～25天；所述的复壮培养基pH为5.5～6.5，包括0.1～0.4mmol·L‑1苯丙氨酸、30～60g·L‑1葡萄糖、500～1000mg·L‑1水解乳蛋白、1.0～4.0mg·L‑1甘氨酸、0.5～2.5mg·L‑1盐酸硫胺素、0.5～1.5mg·L‑1盐酸吡哆醇、0.5～2.0mg·L‑1烟酸和50～200mg·L‑1肌醇，以及无机盐部分；所述的无机盐部分包括：50～150mg·L‑1KH2PO4、500～2000mg·L‑1KNO3、100～300mg·L‑1MgSO4·7H2O、200～500mg·L‑1CaCl2·2H2O、10～30mg·L‑1Na2EDTA·2H2O、1～5mg·L‑1H3BO3、5～20mg·L‑1FeSO4·7H2O、0.01～0.05mg·L‑1CuSO4·5H2O、2～10mg·L‑1ZnSO4·7H2O、0.1～0.5mg·L‑1Na2MoO4·2H2O、0.01～0.05mg·L‑1CoCl2·6H2O、0.2～0.5mg·L‑1KI和5～20mg·L‑1MnSO4·4H2O。