[发明专利]一种黄芩毛状根保藏和复壮方法

说明书

技术领域

本发明属于植物细胞保藏技术领域，涉及一种黄芩毛状根的保藏和复壮方法。

背景技术

植物细胞保藏技术是生产和研究的基础，其原理是通过人工方法使细胞进入休眠状态，降低其生长代谢活动，达到抑制细胞增殖和减少变异的目的。常用的植物细胞保藏方法有液氮超低温保藏法和低温冷藏法：液氮保藏需专用器具、成本高，一般只在专业保藏机构中使用；实验室多采用低温冷藏法保藏植物细胞，但保存过程会因代谢产物累积而改变其生存环境，一般1～4个月须重新进行转接保藏，虽不需特殊设备，但烦琐费时，故仅限于短期保藏，且经常移植容易引起细胞退化。

黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi），为唇形科（Labiatae）植物，其药用部位为黄芩干燥根，性寒、味苦，归肺、心、肝、胆、大肠经，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。黄芩主要分布于河北、辽宁、陕西、山东、内蒙古等地，主要成分是黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、黄芩酮Ⅰ、黄芩酮Ⅱ、千层纸黄素A及菜油甾醇等。近年来，研究发现其主要有效成分黄芩苷有抗HIV、抗肿瘤、抗氧化及清除氧自由基等作用，随着新药不断开发，黄芩用量在迅速增加，黄芩资源的可持续发展问题日显重要。

毛状根培养技术是20世纪80年代后期在植物细胞领域发展起来的一项新技术，与一般的植物细胞培养相比，毛状根可以生长在不含激素的培养基上。在诱导出毛状根的基础上，结合细胞培养技术建立起毛状根培养系统。这一培养系统对传统药材来说很重要，因为约1/3的传统中药材是植物的根部，曾经被认为难以通过细胞培养来生产的许多源于植物根部的药物，现在正被设法通过培养毛状根来生产。毛状根培养遵循一般的生长模式，代谢产物不一定是生长相关的，但是毛状根的遗传性能和次级代谢产物合成能力比较稳定，为进行毛状根的高密度培养创造了较好的有利条件。因此，毛状根培养技术已被认为是生产药用植物次生代谢产物的一条重要途径，具有非常广泛的应用前景。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种黄芩毛状根的保藏和复壮方法，通过对保藏和复壮条件的优化，实现了黄芩优良毛状根株系的保存。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种黄芩毛状根的保藏和复壮方法，包括以下步骤：

1）挑选处于对数生长期的黄芩毛状根，接种入保藏培养基中，室温下，避光静置保藏；所述的保藏培养基pH为5.5～6.5，包括1～4g·L^-1蔗糖、0.5～2.0mg·L^-1甘氨酸、0.5～1.0mg·L^-1盐酸硫胺素、0.1～0.5mg·L^-1盐酸吡哆醇、0.1～1.0mg·L^-1烟酸和10～100mg·L^-1肌醇，以及无机盐部分；

2）取保藏培养的黄芩毛状根，接种到活化培养基中，在25～28℃、避光震荡或摇瓶培养20～25天；所述的活化培养基pH为5.5～6.5，包括10～30g·L^-1蔗糖、100～500mg·L^-1水解乳蛋白、0.5～2.0mg·L^-1甘氨酸、0.5～1.0mg·L^-1盐酸硫胺素、0.1～0.5mg·L^-1盐酸吡哆醇、0.1～1.0mg·L^-1烟酸和10～100mg·L^-1肌醇，以及无机盐部分；

3）取活化后的黄芩毛状根，接种入复壮培养基中，在25～28℃、避光震荡或摇瓶培养20～25天；所述的复壮培养基pH为5.5～6.5，包括0.1～0.4mmol·L^-1苯丙氨酸、30～60g·L^-1葡萄糖、500～1000mg·L^-1水解乳蛋白、1.0～4.0mg·L^-1甘氨酸、0.5～2.5mg·L^-1盐酸硫胺素、0.5～1.5mg·L^-1盐酸吡哆醇、0.5～2.0mg·L^-1烟酸和50～200mg·L^-1肌醇，以及无机盐部分；