[发明专利]一种重组磷脂酶D的生产方法

摘要

本发明涉及利用基因工程菌发酵生产磷脂酶D的方法，尤其是一种重组磷脂酶D的生产方法。其特点是，包括如下步骤：（1）构建重组基因工程菌；（2）配制摇瓶种子培养基和发酵培养基；（3）将构建的重组基因工程菌在平板上活化16~20小时，再接种至装有摇瓶种子培养基的摇瓶中，得到种子液；（4）接入发酵培养基中进行发酵；添加诱导剂至其在发酵液中的终体积浓度为1%~5%；继续发酵32~48小时；（5）从发酵液的培养物中获得磷脂酶D即可。本发明的生产方法与现有技术相比具有以下有益效果：采用慢速利用碳源糊精作为碳源，一方面增加了细胞的培养密度，实现了高密度发酵，另一方面减缓了PLD的表达速度减少了包涵体的生成。

主权项

一种重组磷脂酶D的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）构建重组基因工程菌，该基因工程菌为表达了磷脂酶D的重组大肠杆菌；（2）配制摇瓶种子培养基和发酵培养基；（3）将构建的重组基因工程菌在平板上活化16~20小时，再挑取在平板上活化后的基因工程菌接种至装有摇瓶种子培养基的摇瓶中，在37℃的条件下振荡培养10‑16小时，得到种子液；（4）将得到的种子液接入发酵培养基中进行发酵，接种比例按照种子液/发酵培养基（V/V）为1%~10%进行；发酵培养的温度控制在20~37℃，发酵液的pH值控制在6.5~7.5，溶氧控制在20%~40%；当发酵液中的细胞光密度OD600在0.5~0.9时，向发酵液中添加诱导剂至其在发酵液中的终体积浓度为1%~5%；然后继续发酵32~48小时；（5）从发酵液的培养物中获得磷脂酶D即可。