[发明专利]鲍曼不动杆菌特异性卵黄免疫球蛋白的制备方法、应用及药物组合物、制剂和试剂盒

摘要

本发明提供了一种鲍曼不动杆菌特异性卵黄免疫球蛋白的制备方法、应用及药物组合物、制剂和试剂盒。本发明的鲍曼不动杆菌特异性卵黄免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）调制抗原液、（2）免疫母鸡、（3）分离、纯化卵黄免疫球蛋白。体内体外实验表明，本发明制备得到的特异性IgY与鲍曼不动杆菌具有特异结合活性，可以有效抑制鲍曼不动杆菌的生长及其产生的毒性效应，可用于鲍曼不动杆菌感染性疾病及其并发症的防治和诊断分析，具有广阔的应用前景。

主权项

一种鲍曼不动杆菌特异性卵黄免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）调制抗原液将鲍曼不动杆菌菌种接种于TSB液体培养基中，37℃培养18‑24h后，离心收集菌体，菌体以生理盐水稀释至108‑1010cfu/mL，向菌液中加入菌液体积0.5%的甲醛，37℃灭活24h，不时摇动，经无菌检验合格后分别加入等体积的弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂，充分乳化后制成全菌灭活疫苗，4℃保存；（2）免疫母鸡选用140‑160日龄的产蛋母鸡，于每只鸡胸肌注射2点、颈部皮下注射1点进行免疫，共免疫三次，首次免疫的疫苗为加入弗氏完全佐剂的抗原液，加强免疫的疫苗为加入弗氏不完全佐剂的抗原液，三次免疫剂量递增，分别为每只鸡1.0mL、1.5mL和2.0mL，每次免疫间隔14天，收集首次免疫后1‑160天的鸡蛋于4℃分类保存；（3）分离、纯化卵黄免疫球蛋白取免疫鸡蛋，擦洗消毒，去蛋壳，用蛋黄分离器去除蛋白，而后用无菌滤纸进一步吸取蛋白，刺破蛋黄膜收集蛋黄，卵黄液加6‑10倍体积的去离子水稀释，用盐酸调pH至5.0，搅匀后4℃放置过夜，在4℃下10000rpm离心25min，取上清液，进行盐析后，盐析溶液经超滤、冷冻干燥得冻干粉。