[发明专利]鲍曼不动杆菌特异性卵黄免疫球蛋白的制备方法、应用及药物组合物、制剂和试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鲍曼不动杆菌特异性卵黄免疫球蛋白的制备方法、应用及药物组合物、制剂和试剂盒。 

背景技术

鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）为非发酵革兰阴性杆菌，是不动杆菌中引起人类感染的主要菌群，主要引起呼吸道感染、菌血症、泌尿系统感染、伤口感染、脑膜炎等，亦可引起腹膜炎、心内膜炎、眼内炎等，最常见的感染部位为肺部，是医院获得性肺炎的重要致病原。 

随着临床抗菌药物的大量使用，鲍曼不动杆菌的耐药性也越来越强，已对头孢菌素类、氨基糖苷类、喹诺酮类等常用抗菌药物出现多重耐药性，甚至对碳青烯霉类药物包括亚胺培南或美洛培南在内均出现耐药性，这给临床治疗带来极大困难。 

卵黄免疫球蛋白（Egg yolk immunoglobulin，IgY）是禽类B淋巴细胞在抗原物质刺激下所产生并沉积在卵黄中的能与抗原发生特异性反应的一种免疫球蛋白，是禽类在长期进化过程中形成的用于提高抵抗力的物质。IgY除具有特异性强、价廉易得、性质稳定等优点外，与化学药物相比无毒副作用，与抗生素相比不易产生耐药性，因而倍受青睐。美国FDA已将特异性卵黄抗体视为替代抗生素的首要候选药物，日本政府投入巨资扶持“禽源抗 体产业”。 

目前，多种特异性IgY已经在人类和动物疾病的预防和治疗方面得到了应用。特异性IgY在人类疾病防治中的应用包括婴儿轮状病毒性腹泻、幽门螺杆菌感染、龋齿等，但在鲍曼不动杆菌感染性疾病防治中的应用目前还未见报道。 

发明内容

本发明的目的是提供一种鲍曼不动杆菌特异性卵黄免疫球蛋白（IgY）的制备方法及应用、以及由该IgY制备得到的药物组合物、制剂和试剂盒。 

具体而言，本发明的所述鲍曼不动杆菌特异性卵黄免疫球蛋白的制备方法包括如下步骤： 

（1）调制抗原液 

将鲍曼不动杆菌菌种接种于TSB液体培养基中，37℃培养18-24h后，离心收集菌体，菌体以生理盐水稀释至10⁸-10¹⁰cfu/mL，向菌液中加入菌液体积0.5%的甲醛，37℃灭活24h，不时摇动，经无菌检验合格后分别加入等体积的弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂，充分乳化后制成全菌灭活疫苗，4℃保存； 

（2）免疫母鸡 

选用140-160日龄的产蛋母鸡，于每只鸡胸肌注射2点、颈部皮下注射1点进行免疫，共免疫三次，首次免疫的疫苗为加入弗氏完全佐剂的抗原液，加强免疫的疫苗为加入弗氏不完全佐剂的抗原液，三次免疫剂量递增，分别为每只鸡1.0mL、1.5mL和2.0mL，每次免疫间隔14天，收集首次免疫后1-160天的鸡蛋于4℃分类保存； 

（3）分离、纯化卵黄免疫球蛋白 

取免疫鸡蛋，擦洗消毒，去蛋壳，用蛋黄分离器去除蛋白，而后用无菌滤纸进一步吸取蛋白，刺破蛋黄膜收集蛋黄，卵黄液加6-10倍体积的去离子水稀释，用盐酸调pH至5.0，搅匀后4℃放置过夜，在4℃下10000rpm离心25min，取上清液，进行盐析后，盐析溶液经超滤、冷冻干燥得冻干粉。 

其中，所述鲍曼不动杆菌菌种可以使用市售的鲍曼不动杆菌标准菌，也可以使用医院分离获得的多药耐药性鲍曼不动杆菌。 

本发明的所述应用包括上述制备的鲍曼不动杆菌特异性卵黄免疫球蛋白在制备用于防治鲍曼不动杆菌感染性疾病的药物中的应用和在制备用于分析诊断鲍曼不动杆菌感染性疾病的药物中的应用。 

在上述应用中，所述鲍曼不动杆菌感染性疾病一般是指鲍曼不动杆菌感染性的呼吸道感染、菌血症、泌尿系统感染、伤口感染、脑膜炎、腹膜炎、心内膜炎、眼内炎中的一种或两种以上，尤其是指鲍曼不动杆菌感染性肺炎或菌血症。 

本发明还提供一种药物组合物及其制剂。所述药物组合物包含上述制备的鲍曼不动杆菌特异性卵黄免疫球蛋白和药学上可接受的辅料。所述制剂是由上述药物组合物制备得到的制剂，为口服制剂、注射制剂或外用制剂，包括片剂、胶囊剂、微囊剂、注射剂、输液、软膏剂等。