[发明专利]抗菌肽LP基因转化酵母的发酵生产方法

摘要

本发明属于生物发酵领域，提供了一种抗菌肽的发酵方法，包括步骤：（1）摇瓶种子的制备；（2）发酵罐培养。本发明将含LP基因质粒转化的工程酵母在合适的培养基和培养条件下，培养出摇瓶种子，然后将摇瓶种子扩大到发酵培养基再进行发酵生产，生产工艺简便且成本低，发酵产物无需分离纯化，质量稳定，可大规模生产。

主权项

一种抗菌肽发酵生产方法，包括摇瓶种子的制备、发酵罐培养，其特征在于：（1）摇瓶种子的制备：将含抗菌肽LP基因质粒转化的酵母作为菌种接入三角瓶中，在28‑30℃，摇床转速180‑300转/分的条件下，培养24‑36小时得到摇瓶种子；（2）发酵罐培养：将（1）中已培养好的种子接入发酵罐，接种量为2‑10%，在28‑30℃，搅拌速率200‑700转/分，罐压0.1‑0.4兆帕，风量1:1.2‑1:1.4体积/体积/分，pH 5.0‑7.0的条件下，培养24‑72小时，将发酵所得抗菌肽在100‑120℃下加热10‑20分钟；其中所用的摇瓶种子培养基组分及重量百分含量为：蛋白胨2%、酵母粉1%、YNB 1.34%、生物素0.4mg/L、甘油1%、磷酸盐缓冲液100mmol/L；发酵培养基1L含：85%磷酸26.7mL，CaSO4·2H2O 0.93g，K2SO4 18.2g，MgSO4·7H2O 14.9g，KOH 4.13g，甘油 40.0g，PTM1溶液4.35mL，28%氨水调pH至5.0，PTM1溶液1L含：CuSO4·5H2O 6.0g，Na2I 0.08g，MnSO4·H2O 3.0g， Na2MoO4·2H2O 0.2g，H3BO3 0.02g，COCl2·6H2O 0.5g，ZnCl2 20.0g，FeSO4·7H2O 65.0g，生物素0.2g，硫酸5.0 ml。