[发明专利]抗菌肽LP基因转化酵母的发酵生产方法

权利要求书

1.一种抗菌肽发酵生产方法，包括摇瓶种子的制备、发酵罐培养，其特征在于：

（1）摇瓶种子的制备：将含抗菌肽LP基因质粒转化的酵母作为菌种接入三角瓶中，在28-30℃，摇床转速180-300转/分的条件下，培养24-36小时得到摇瓶种子；

（2）发酵罐培养：将（1）中已培养好的种子接入发酵罐，接种量为2-10%，在28-30℃，搅拌速率200-700转/分，罐压0.1-0.4兆帕，风量1:1.2-1:1.4体积/体积/分，pH 5.0-7.0的条件下，培养24-72小时，将发酵所得抗菌肽在100-120℃下加热10-20分钟；其中所用的摇瓶种子培养基组分及重量百分含量为：蛋白胨2%、酵母粉1%、YNB 1.34%、生物素0.4mg/L、甘油1%、磷酸盐缓冲液100mmol/L；发酵培养基1L含：85%磷酸26.7mL，CaSO₄·2H₂O 0.93g，K₂SO₄ 18.2g，MgSO₄·7H₂O 14.9g，KOH 4.13g，甘油 40.0g，PTM1溶液4.35mL，28%氨水调pH至5.0，PTM1溶液1L含：CuSO₄·5H₂O 6.0g，Na₂I 0.08g，MnSO₄·H₂O 3.0g， Na₂MoO₄·2H₂O 0.2g，H₃BO₃ 0.02g，COCl₂·6H₂O 0.5g，ZnCl₂ 20.0g，FeSO₄·7H₂O 65.0g，生物素0.2g，硫酸5.0 ml。

2.根据权利要求1所述的抗菌肽LP基因转化酵母发酵生产方法，其特征在于  发酵生产时菌种用量超过5升时，在摇瓶培养后和发酵罐培养前进行种子罐培养。

3.根据权利要求2所述的抗菌肽LP基因转化酵母发酵生产方法，其特征在于所述的种子罐培养，是将摇好的摇瓶种子接入种子罐中，接种量2-10%，在28-30℃，搅拌速率200-700转/分，罐压0.1-0.4兆帕，风量1:1.2-1:1.4体积/体积/分，pH 5.0-7.0的条件下，培养24-72小时。

4.根据权利要求1、2或3所述的抗菌肽LP基因转化酵母发酵生产方法，其特征在于所用的摇瓶种子培养基组分及重量百分含量为：蛋白胨2%、酵母粉1%、YNB 1.34%、生物素0.4mg/L、甘油1%、磷酸盐缓冲液100mmol/L。

5.根据权利要求1、2或3所述的抗菌肽LP基因转化酵母发酵生产方法，其特征在于所用的发酵培养基组分及含量为（1L）：85%磷酸26.7mL，CaSO₄·2H₂O 0.93g，K₂SO₄ 18.2g，MgSO₄·7H₂O 14.9g，KOH 4.13g，甘油 40.0g，PTM1溶液4.35mL，28%氨水调pH至5.0，PTM1溶液1L含：CuSO₄·5H₂O 6.0g，Na₂I 0.08g，MnSO₄·H₂O 3.0g， Na₂MoO₄·2H₂O 0.2g，H₃BO₃ 0.02g，COCl₂·6H₂O 0.5g，ZnCl₂ 20.0g，FeSO₄·7H₂O 65.0g，生物素0.2g，硫酸5.0 ml。