[发明专利]重组人长效白介素1受体拮抗剂融合蛋白的纯化方法无效
| 申请号： | 201210433642.1 | 申请日： | 2012-11-02 |
| 公开（公告）号： | CN102952836A | 公开（公告）日： | 2013-03-06 |
| 发明（设计）人： | 徐岩;李征;王海彬;陈枢青;沈其;聂磊;白骅 | 申请（专利权）人： | 浙江海正药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K19/00;C07K1/36;C07K1/22;C07K1/18;C12R1/84 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 318000 浙江省台州市椒*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种重组人长效白介素1受体拮抗剂融合蛋白的纯化方法，包括发酵表达获得含有目的蛋白的发酵液、预处理、强阴离子交换层析、蓝胶亲和层析、弱阴离子交换层析。本发明得到较高纯度的目的蛋白，有效解决了在大规模发酵生产中无法得到足够纯度的目的蛋白的难题。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 长效 白介素 受体 拮抗剂 融合 蛋白 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种重组人长效白介素1受体拮抗剂融合蛋白的纯化方法，该方法包括：（1）将能够表达重组人长效白介素1受体拮抗剂融合蛋白的基因工程菌株进行发酵表达，获得含有目的蛋白的发酵液，经预处理制得含目的蛋白的浓缩液，所述目的蛋白为HSA‑IL‑1Ra、HSA‑（G）n‑IL‑1Ra、IL‑1Ra‑HSA或IL‑1Ra‑（G）n‑HSA，其中（G）n为肽接头，G的序列为GlyGlyGlyGlySer，n为1‑4的整数； （2）将上步所得的浓缩液进行强阴离子交换层析，获得含目的蛋白的洗脱液，所用层析介质含有季铵基或季铵乙基配基且所用介质的基质为琼脂糖或葡聚糖；（3）将上步所得洗脱液进行蓝胶亲和层析，获得含目的蛋白的洗脱液，所用层析介质含有Cibacron Blue配基；（4）将上步所得洗脱液进行弱阴离子交换层析，获得含目的蛋白的洗脱液，其中弱阴离子交换层析所用介质含有二乙基氨基乙基配基，所述介质的基质为琼脂糖、葡聚糖或聚甲基丙烯酸甲酯；所用洗脱目的蛋白的缓冲液含有10~50mM NaH2PO4和20~35mM NaCl，pH为5.5~6.5。
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