[发明专利]利用固料培养基培养高山被孢霉制备花生四烯酸的方法

摘要

本发明公开了一种利用固料培养基培养高山被孢霉制备花生四烯酸的方法，以米糠、玉米粒为物料，适量添加无机盐作为固料培养基，菌种经液体培养后，收集菌体并粉碎，接种至固料培养基中，控制培养温度，在培养过程中补水控制相对湿度并适当搅拌，使其产生大量的孢子。发酵过程使用柠檬酸及柠檬酸盐进行pH值分段调控。本方法所提供的种子孢子量大，同步性佳，活力强，可以缩短高山被孢霉的发酵周期，并通过pH值分段调控促进高山被孢霉的生长与ARA油脂积累，能够提高ARA的产量和质量。

主权项

利用固料培养基培养高山被孢霉制备花生四烯酸的方法，其特征在于：将在PDA培养基上长好的菌种用20mL无菌生理盐水洗下，制成菌悬液，接种至灭菌好的装量为50mL的液体摇瓶培养基中，于28℃，180rpm恒温摇床培养2天，在液体摇瓶中培养好的菌体通过过滤收集菌体，经无菌水洗涤，用电磨机粉碎成长度在1000～2000μm，再接种至灭菌好的固料培养基中，充分搅拌使菌种均匀分布于培养基中，并摊匀物料，于28℃培养3～5天，培养期间，每24h时补水2mL以维持适当的相对湿度，并搅拌翻料，将400mL无菌生理盐水倒入培养好的固料种子的克氏瓶中，充分振荡，以洗下孢子，孢子液按1.2％的接种量接入30L种子罐中进行放大培养，二级种子液再以10％的接种量接入100L发酵罐进行发酵生产花生四烯酸，所述液体摇瓶培养基：葡萄糖20～60g/L，酵母粉5～20g/L，硫酸镁0.1～1g/L，磷酸二氢钾0.1～2g/L；所述固料培养基：以米糠、玉米碎粒为原料，与浓度为1～3g/L磷酸氢二钾按10：1～5的质量比混匀，在不锈钢锅内蒸煮30min后，摊开晾开表面水分，分装于1000mL克氏瓶中，每瓶装量为200g，于121℃灭菌30min。