[发明专利]利用固料培养基培养高山被孢霉制备花生四烯酸的方法

权利要求书

1.利用固料培养基培养高山被孢霉制备花生四烯酸的方法，其特征在于：将在PDA培养基上长好的菌种用20mL无菌生理盐水洗下，制成菌悬液，接种至灭菌好的装量为50mL的液体摇瓶培养基中，于28℃，180rpm恒温摇床培养2天，在液体摇瓶中培养好的菌体通过过滤收集菌体，经无菌水洗涤，用电磨机粉碎成长度在1000～2000μm，再接种至灭菌好的固料培养基中，充分搅拌使菌种均匀分布于培养基中，并摊匀物料，于28℃培养3～5天，培养期间，每24h时补水2mL以维持适当的相对湿度，并搅拌翻料，将400mL无菌生理盐水倒入培养好的固料种子的克氏瓶中，充分振荡，以洗下孢子，孢子液按1.2％的接种量接入30L种子罐中进行放大培养，二级种子液再以10％的接种量接入100L发酵罐进行发酵生产花生四烯酸，所述液体摇瓶培养基：葡萄糖20～60g/L，酵母粉5～20g/L，硫酸镁0.1～1g/L，磷酸二氢钾0.1～2g/L；所述固料培养基：以米糠、玉米碎粒为原料，与浓度为1～3g/L磷酸氢二钾按10：1～5的质量比混匀，在不锈钢锅内蒸煮30min后，摊开晾开表面水分，分装于1000mL克氏瓶中，每瓶装量为200g，于121℃灭菌30min。

2.按权利要求1所述的利用固料培养基培养高山被孢霉制备花生四烯酸的方法，其特征在于：所述的固体培养基所用物料为：米糠、玉米碎粒，米糠、玉米碎粒的质量比为10∶1～5。

3.按权利要求1所述的利用固料培养基培养高山被孢霉制备花生四烯酸的方法，其特征在于：所述发酵过程pH值进行分段控制，前48h使pH值稳定在6.0～6.5之间，而后使pH值稳定在7.0～9.0之间。

4.按权利要求3所述的利用固料培养基培养高山被孢霉制备花生四烯酸的方法，其特征在于：所述发酵过程进行pH值分段控制使用于调节pH值的物质为柠檬酸及柠檬酸盐。