[发明专利]一种核酸扩增方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开了一种核酸扩增方法及其试剂盒。本发明利用限制性切刻酶进行双链DNA和/或单链DNA的扩增。除额外加入限制性切刻酶外不需要添加任何另外的试剂，也就不存在这些物质对后续TMA或NASBA反应的影响，因此可以避免额外添加限制性寡核苷酸造成的扩增效率降低、非特异产物增加的问题。本发明所述方法及试剂盒可以用于任何类型的DNA、样品中待检病毒DNA以及基因组DNA，不仅可以用于DNA混合样本的多重检测，还适用于DNA和RNA混合样本的多重检测，与其他相关技术结合，能广泛地应用于分子诊断、科学研究、防疫检测、法医鉴定等领域。

主权项

一种核酸扩增方法，其特征在于，该方法从存在于样品中的DNA开始，其具体包括以下步骤：A、在扩增缓冲液中温育待测样品，该温育体系中含有：一或多种能够在所选限制位点切割DNA的限制性切刻酶，该限制性切刻酶在该DNA的一条链上形成特定的3`末端；启动子引物，该启动子引物的5`区域包含被依赖DNA的RNA聚合酶所识别的启动子序列且其3`区域与该DNA链特定的3`末端反向互补；第二或反向引物，其具有与启动子引物相反的极性且含有目标序列的5`末端；B、将如此形成的反应混合物在适当的条件下保持足够的时间，以进行限制性切刻酶的消化；C、将样品以足以失活限制性切刻酶和/或导致双链的单链化的温度和时间进行加热处理；D、向样品中加入下列试剂，具有依赖RNA的DNA聚合酶活性的酶具有依赖DNA的DNA聚合酶活性的酶具有RNaseH活性的酶具有RNA聚合酶活性的酶F、将如此形成的反应混合物在适当的条件下保持足够的时间，以进行扩增。