[发明专利]单分子力谱分析用AFM探针和基底功能化修饰方法

摘要

本发明的目的在于提供一种单分子力谱分析用原子力显微镜单分子力谱测量的探针和基底表面功能化方法，本发明首先将一端Boc基团保护另外一端为巯基的的PEG高分子偶联到金膜修饰的原子力显微镜探针或者金基底上，其次将生物分子本身含有的伯胺利用蛋白修饰试剂SATA或者SATP修饰为巯基，最后将Boc保护基团脱除，并与巯基化的生物分子反应，从而将蛋白修饰到金探针和金基底上。该方法工艺简单，操作简便，可以实现在单分子水平研究生物分子之间相互作用力及细胞表面单分子识别等的目标。

主权项

一种单分子力谱分析用原子力显微镜探针和基底功能化修饰方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：在氯仿中清洗针尖镀金的原子力显微镜探针和金基底，探针和金基底，在氮气下干燥，紫外臭氧清洗，随后用超纯水清洗，氯仿清洗，氮气下干燥；第二步：将清洗干净的金探针和金基底放入到氯仿为溶剂的氨基甲酸叔丁酯–聚乙二醇–巯基（Boc‑PEG‑3000‑SH）和甲氧基–聚乙二醇–巯基（mPEG‑2000‑SH）混合液中避光反应；第三步：在蛋白溶液中加入蛋白修饰试剂N‑琥珀酰亚胺基‑S‑乙酰硫基乙酸酯 （SATA），或N‑琥珀酰亚胺‑3‑乙酰硫代丙酸酯（SATP），并反应一段时间；第四步：在第三步得到的蛋白溶液中，加入脱乙酰缓冲液中反应，反应时间为0.5 ～3小时，随后利用脱盐柱脱去蛋白溶液中的盐；第五步：取第二步得到的金探针和金基底放入到三氟乙酸中，超纯水清洗；第六步：金探针和金基底放入到交联剂4‑(N‑马来酰亚胺基甲基)环己烷‑1‑羧酸琥珀酰亚胺酯（SMCC），或4‑(N‑马来酰亚胺甲基)环己烷‑1‑羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐（Sulfo‑SMCC）溶液中，反应一段时间，超纯水清洗；第七步：金探针和金基底置入到第四步处理得到的蛋白溶液，反应，超纯水清洗，置入磷酸盐（PBS）缓冲液中4度保存备用。