[发明专利]一种转化野生型枯草芽孢杆菌的方法有效
| 申请号： | 201210177083.2 | 申请日： | 2012-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN102649967A | 公开（公告）日： | 2012-08-29 |
| 发明（设计）人： | 王琦;汝津江;李燕 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了转化野生型枯草芽孢杆菌的方法。本发明提供的方法包括制备感受态细胞和电击转化两个步骤；所述制备感受态细胞依次包括如下步骤：（1）将野生型枯草芽孢杆菌接种至生长培养基，使野生型枯草芽孢杆菌的初始浓度为1.8×107-7.7×107CFU/mL，35-37℃振荡培养2-3.5h；（2)将1体积份完成步骤(1)的培养体系与0.8-1.2体积份诱导培养基混匀，35-37℃振荡培养1.5-3.5h；所述电击转化包括如下步骤：将待转化的质粒与所述感受态细胞混匀并冰浴，然后采用1.2-1.8kV的电压进行电击，得到导入所述待转化质粒的重组枯草芽孢杆菌。本发明提供的方法，转化效果好，操作简便。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 转化 野生型 枯草 芽孢 杆菌 方法 | ||
【主权项】：
一种转化野生型枯草芽孢杆菌的方法，包括制备感受态细胞和电击转化两个步骤；所述制备感受态细胞依次包括如下步骤：（1）将野生型枯草芽孢杆菌接种至生长培养基，使野生型枯草芽孢杆菌的初始浓度为1.8×107‑7.7×107CFU/mL，35‑37℃振荡培养2‑3.5h；所述生长培养基的溶剂为水，溶质及其浓度如下：硫酸铵1.8‑2.2g/L、磷酸氢二钾14‑16g/L、柠檬酸三钠1.5‑2.5g/L、硫酸镁0.09‑0.1g/L、葡萄糖4.8‑5.2g/L和酪蛋白水解物0.18‑0.22g/L；（2)将1体积份完成步骤(1)的培养体系与0.8‑1.2体积份诱导培养基混匀，35‑37℃振荡培养1.5‑3.5h；所述诱导培养基的溶剂为水，溶质及其浓度如下：硫酸铵1.8‑2.2g/L、磷酸氢二钾14‑16g/L、柠檬酸三钠1.5‑2.5g/L、硫酸镁0.09‑0.1g/L和葡萄糖4.8‑5.2g/L；所述电击转化包括如下步骤：将待转化的质粒与所述感受态细胞混匀并冰浴，然后采用1.2‑1.8kV的电压进行电击，得到导入所述待转化质粒的重组枯草芽孢杆菌。
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