[发明专利]一种转化野生型枯草芽孢杆菌的方法

权利要求书

1.一种转化野生型枯草芽孢杆菌的方法，包括制备感受态细胞和电击转化两个步骤；

所述制备感受态细胞依次包括如下步骤：

（1）将野生型枯草芽孢杆菌接种至生长培养基，使野生型枯草芽孢杆菌的初始浓度为1.8×10⁷-7.7×10⁷CFU/mL，35-37℃振荡培养2-3.5h；所述生长培养基的溶剂为水，溶质及其浓度如下：硫酸铵1.8-2.2g/L、磷酸氢二钾14-16g/L、柠檬酸三钠1.5-2.5g/L、硫酸镁0.09-0.1g/L、葡萄糖4.8-5.2g/L和酪蛋白水解物0.18-0.22g/L；

（2)将1体积份完成步骤(1)的培养体系与0.8-1.2体积份诱导培养基混匀，35-37℃振荡培养1.5-3.5h；所述诱导培养基的溶剂为水，溶质及其浓度如下：硫酸铵1.8-2.2g/L、磷酸氢二钾14-16g/L、柠檬酸三钠1.5-2.5g/L、硫酸镁0.09-0.1g/L和葡萄糖4.8-5.2g/L；

所述电击转化包括如下步骤：将待转化的质粒与所述感受态细胞混匀并冰浴，然后采用1.2-1.8kV的电压进行电击，得到导入所述待转化质粒的重组枯草芽孢杆菌。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述待转化质粒与所述感受态细胞的配比为：100ng-5μg所述待转化质粒：0.2×10⁹CFU-0.49×10⁹CFU感受态细胞。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述制备感受态细胞还包括如下步骤（3）：将完成所述步骤（2）的培养体系冰浴30min，然后4℃离心收集细胞。

4.如权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述电击转化中，所述冰浴的时间为30min。

5.如权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述电击转化中，所述电击的电阻为200Ω、电容为25μF。

6.如权利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：所述电击转化还包括在所述电击后进行如下处理的步骤：向电击杯中加入700-1000μL 30-37℃预热的LB液体培养基并混匀，然后30-37℃振荡培养3h。

7.如权利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：所述待转化的质粒为穿梭载体pBE2、穿梭载体pS4GFP或穿梭载体pMarA。

8.如权利要求1至7中任一所述的方法，其特征在于：所述野生型枯草芽孢杆菌为未经过遗传工程改造的枯草芽孢杆菌。