[发明专利]一种两核苷酸实时合成DNA解码测序方法

摘要

一种两核苷酸实时合成DNA解码测序方法，单个测序反应由X、Y两个不同的核苷酸同时进行，依据合成核苷酸数目与实时产生的检测分子数的定量关系，得到一个碱基序列片段编码XYn。整个测序包括对同一模板进行二组测序反应：每组测序由包含四个核苷酸dATP、dCTP、dGTP、dTTP，按照每个核苷酸在一个循环中只使用一次的方式，进行由两个不同核苷酸同时合成测序反应的循环，若干次测序反应后得到由一组按照测序顺序排列的若干XYn信息；当该组测序反应完成后，变性将测序引物延伸链清除，重新杂交测序引物，进行第二组测序反应，得到第二测序反应排列的若干XYn信息，最后通过解码二组按照测序顺序排列的若干XYn信息，组装出待测核酸片段的具体碱基序列。

主权项

一种两核苷酸实时合成DNA解码测序方法，其特征在于单个测序反应由X、Y两个不同的核苷酸同时进行，依据合成核苷酸数目与实时产生的检测分子数的定量关系，得到一个碱基序列片段编码XYn；所述XYn信息包括该测序反应参与的核苷酸种类X、Y，以及碱基序列片段包括的碱基数目n；一个编码XYn对应包括唯一的正确序列片段在内的2n个碱基序列片段；整个测序包括对同一模板进行二组测序反应：每组测序由包含四个核苷酸dATP、dCTP、dGTP、dTTP，按照每个核苷酸在一个循环中只使用一次的方式，进行由两个不同核苷酸同时合成测序反应的循环，若干次测序反应后得到由一组按照测序顺序排列的若干XYn信息；当该组测序反应完成后，变性将测序引物延伸链清除，重新杂交测序引物，进行第二组测序反应，得到第二测序反应排列的若干XYn信息，最后通过解码二组按照测序顺序排列的若干XYn信息，组装出待测核酸片段的具体碱基序列。