[发明专利]利用七叶苷和4-MUG从fosmid文库中筛选β-葡萄糖苷酶的方法有效
| 申请号： | 201210127162.2 | 申请日： | 2012-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN102732597A | 公开（公告）日： | 2012-10-17 |
| 发明（设计）人： | 黄黎锋;李海峰;蓝袁洋 | 申请（专利权）人： | 杭州师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/34 | 分类号： | C12Q1/34;C12Q1/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;王兵 |
| 地址： | 310036 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用七叶苷和4-MUG从fosmid文库中筛选β-葡萄糖苷酶的方法：(1)从富含纤维素资源的地点采集土样，提取总DNA，构建fosmid文库，获得富集菌液；(2)将富集菌液于含七叶苷的基础培养基中，20～40℃培养12～24h进行初筛，挑取菌落周围呈现黑色的菌株接种至基础培养基中，20～40℃培养12～24h进行复筛，再将4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷的低熔点琼脂糖溶液均匀平铺在复筛平板上，20～40℃培养0.1～1h，紫外灯下观察菌落周围显荧光的，即得所述β-葡萄糖苷酶产生菌株，进而获得β-葡萄糖苷酶的DNA序列；本发明方法筛选时间短，精度高，误差少。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 七叶苷 mug fosmid 文库 筛选 葡萄 糖苷酶 方法 | ||
【主权项】：
一种利用七叶苷和4‑MUG从fosmid文库中筛选β‑葡萄糖苷酶的方法，其特征在于所述方法为：(1)从富含纤维素资源的地点采集土样，提取总DNA，构建fosmid文库，获得富集菌液；(2)将富集菌液于含七叶苷的基础培养基中，20～40℃培养12～24h进行初筛，获得菌落周围呈现黑色的菌株；所述含七叶苷的基础培养基的终浓度组成为：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，琼脂粉10～20g/L，七叶苷0.1～1g/L，柠檬酸铁0.1～5g/L，氯霉素10～50mg/L，溶剂为水；(3)挑取步骤(2)获得的菌落周围呈现黑色的菌株接种至基础培养基中，20～40℃培养12～24h进行复筛，获得复筛后的平板；所述基础培养基终浓度组成为：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，琼脂粉10～20g/L，氯霉素10～50mg/L，溶剂为水；(4)取4‑甲基伞形酮‑β‑D‑葡萄糖苷的低熔点琼脂糖溶液均匀平铺在步骤(3)获得的平板上，20～40℃培养0.1～1h，紫外灯下观察菌落，菌落周围显荧光的，即得所述β‑葡萄糖苷酶产生菌株，进而获得β‑葡萄糖苷酶的DNA序列，若无荧光的，即为假阳性菌株；所述4‑甲基伞形酮‑β‑D‑葡萄糖苷的低熔点琼脂糖溶液的终浓度组成为：4‑甲基伞形酮‑β‑D‑葡萄糖苷0.1～1g/L，低熔点琼脂糖1～10g/L，溶剂为水，所述低熔点琼脂糖凝胶温度为24～28℃。
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