[发明专利]一种二十年生木荷大树高效离体繁殖方法

摘要

一种二十年生木荷大树高效离体繁殖方法，采用二十年生木荷大树上生长的腋芽茎段为外植体，经消毒灭菌后，接种于启动培养基中，先放置于黑暗条件下培养7-12d，再放置于普通日光灯下，每日光照16h，温度23-25℃、湿度50％-60％，培养40d分化长成试管芽苗；将长成的试管芽苗剪切、转接于经高压灭菌的增殖培养基中进行增殖培养，然后再将增殖的试管芽苗剪切后接种于经高压灭菌的壮苗培养基中进行壮苗培养，32d后剪除基部愈伤组织和部分叶片，保留3-4片叶片，接种于经高压灭菌的生根培养基中进行生根培养12-15d，取出清洗，移栽到含有泥炭、黄心土、珍珠岩的混合基质中，其体积比为泥炭∶黄心土∶珍珠岩＝2∶1∶1，25d后生根成活，生根率达96％以上。

主权项

一种二十年生木荷大树高效离体繁殖方法，其特征是按下列步骤进行：(1)、准备基本培养基，每升基本培养基中含有：四水硝酸钙371‑556mg，硝酸铵268‑400mg，硫酸钾600‑900mg，七水硫酸镁248‑370mg，磷酸二氢钾115‑170mg，二水氯化钙70‑96mg，四水硫酸锰22.5mg，七水硫酸锌8.6mg，硼酸6.2mg，五水硫酸铜0.25mg，二水钼酸钠0.25mg，七水硫酸亚铁41.0mg，乙二胺四乙酸钠56.0mg，维生素B1 1.0mg，维生素B6 0.5mg，VB5 0.5mg，甘氨酸2.0mg，肌醇90mg，蔗糖20000mg，卡拉胶6500mg。(2)、采用经选育的二十年生木荷大树优良单株的腋芽茎段为外植体，经70％酒精消毒20‑35s，再用添加吐温20 1‑2滴/100ml的0.1％的升汞溶液灭菌9‑13min，用无菌水冲洗3‑5次；(3)、在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒的外植体接种在经消毒的含有启动培养基的培养瓶中，先将其置于黑暗条件下7‑12d后，再置于普通日光灯为光源、光照强度为1500‑2000lx下，每日光照16h，温度23‑25℃、湿度为50％‑60％，培养40d，分化长成试管芽苗；所述的启动培养基为：每升基本培养基含：玉米素0.5‑1.5mg、6‑苄基嘌呤1.0‑2.5mg和吲哚丁酸0.01‑0.1mg；(4)、将从(2)步中长成的芽苗，剪切，转接于经消毒的含有增殖培养基的培养瓶中进行增殖培养，不断增殖，视繁殖规模达1000瓶进入下一步；所述的增殖培养基为：每升基本培养基含：玉米素1.0‑1.5mg、6‑苄基嘌呤1.5‑2.5mg、吲哚丁酸0.01‑0.05mg和柠檬酸80‑100mg；(5)、将(3)步中培养的试管芽苗，剪切、接种于经消毒的含有壮苗培养基的培养瓶中进行壮苗培养，32d后进入下一步；所述的壮苗培养基为：每升基本培养基含：玉米素0.5‑1.0mg、6‑苄基嘌呤1.0‑1.5mg、吲哚丁酸0.05‑0.1mg和柠檬酸80‑100mg；(6)、将(4)步中的试管壮苗，剪除基部愈伤组织和部分叶片，保留3‑4片叶片，接种于经消毒的含有生根培养基的培养瓶中，进行生根培养12‑15d；所述的生根培养基为：每升基本培养基含：α‑萘乙酸0.3‑0.5mg、吲哚丁酸0.5‑1.0mg、柠檬酸100‑150mg和硝酸镧8‑10mg；(7)、将(5)步中生长的带有根的小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭、黄土、珍珠岩体积比为泥炭∶黄心土∶珍珠岩＝2∶1∶1的基质中，浇透水，保持温度25‑28℃，相对湿度85％以上，前10d遮光70％，后逐渐见光，25d后生根成活，生根率达96％以上，50d左右，全光照。