[发明专利]一种二十年生木荷大树高效离体繁殖方法

权利要求书

1.一种二十年生木荷大树高效离体繁殖方法，其特征是按下列步骤进行：

(1)、准备基本培养基，每升基本培养基中含有：四水硝酸钙371-556mg，硝酸铵268-400mg，硫酸钾600-900mg，七水硫酸镁248-370mg，磷酸二氢钾115-170mg，二水氯化钙70-96mg，四水硫酸锰22.5mg，七水硫酸锌8.6mg，硼酸6.2mg，五水硫酸铜0.25mg，二水钼酸钠0.25mg，七水硫酸亚铁41.0mg，乙二胺四乙酸钠56.0mg，维生素B1 1.0mg，维生素B6 0.5mg，VB5 0.5mg，甘氨酸2.0mg，肌醇90mg，蔗糖20000mg，卡拉胶6500mg。

(2)、采用经选育的二十年生木荷大树优良单株的腋芽茎段为外植体，经70％酒精消毒20-35s，再用添加吐温20 1-2滴/100ml的0.1％的升汞溶液灭菌9-13min，用无菌水冲洗3-5次；

(3)、在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒的外植体接种在经消毒的含有启动培养基的培养瓶中，先将其置于黑暗条件下7-12d后，再置于普通日光灯为光源、光照强度为1500-2000lx下，每日光照16h，温度23-25℃、湿度为50％-60％，培养40d，分化长成试管芽苗；

所述的启动培养基为：每升基本培养基含：玉米素0.5-1.5mg、6-苄基嘌呤1.0-2.5mg和吲哚丁酸0.01-0.1mg；

(4)、将从(2)步中长成的芽苗，剪切，转接于经消毒的含有增殖培养基的培养瓶中进行增殖培养，不断增殖，视繁殖规模达1000瓶进入下一步；

所述的增殖培养基为：每升基本培养基含：玉米素1.0-1.5mg、6-苄基嘌呤1.5-2.5mg、吲哚丁酸0.01-0.05mg和柠檬酸80-100mg；

(5)、将(3)步中培养的试管芽苗，剪切、接种于经消毒的含有壮苗培养基的培养瓶中进行壮苗培养，32d后进入下一步；

所述的壮苗培养基为：每升基本培养基含：玉米素0.5-1.0mg、6-苄基嘌呤1.0-1.5mg、吲哚丁酸0.05-0.1mg和柠檬酸80-100mg；

(6)、将(4)步中的试管壮苗，剪除基部愈伤组织和部分叶片，保留3-4片叶片，接种于经消毒的含有生根培养基的培养瓶中，进行生根培养12-15d；

所述的生根培养基为：每升基本培养基含：α-萘乙酸0.3-0.5mg、吲哚丁酸0.5-1.0mg、柠檬酸100-150mg和硝酸镧8-10mg；

(7)、将(5)步中生长的带有根的小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭、黄土、珍珠岩体积比为泥炭∶黄心土∶珍珠岩＝2∶1∶1的基质中，浇透水，保持温度25-28℃，相对湿度85％以上，前10d遮光70％，后逐渐见光，25d后生根成活，生根率达96％以上，50d左右，全光照。