[发明专利]一种二十年生木荷大树高效离体繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物离体组织培养快速繁殖的方法，具体为二十年生木荷大树的高效离体组培快繁方法。

背景技术

木荷(Schima superba)属山茶科木荷属，为亚热带地带性常绿大乔木，作为速生景观防火特色树种广泛分布于南方12个省区。木荷生长迅速，少病虫害，对土壤条件要求不严，耐旱力强，同时树冠浓密，叶片厚革质、含水量大、含油脂少、燃点较高、萌芽力强，是南方生物防火林带构建的当家树种和优良的高抗生态防护树种(70％以上的生物防火林带和大量的生态防护林由木荷构建而成)；木荷树干端直，木材坚重致密，结构均匀，力学性质良好，是木地板、木制家具、木制玩具、木制工艺品等优质木制工艺用材树种，如浙江70％的木制玩具用材都来自木荷。大径阶木荷工艺材销价在1500元/m³以上。木荷已列为国家林业局珍贵用材发展名录；木荷栽培容易、早期速生，宜与杉木、马尾松等混交培育大径阶优质用材，是杉木、马尾松二代迹地更新的优良替代树种，广为南方各省重视和喜爱，每年用种量都达到数万kg，是亚热带地区第一大珍贵优质阔叶用材造林树种。

国内外学者对该树种开展了一系列的研究工作，如有良种选育、播种、组织培养育苗，生物防火机理、防火林带构建配套等技术。在现有繁殖技术中，组织培养的方法已有报道，但报道中研究对象为种子、二至十年生树木顶芽和嫩枝茎段，采用原有方法对江苏省林业科学研究院种源试验林的二十年生大树开展组织培养研究未能成功。原因是利用原有方法培养时，发现外植体启动培养困难、增殖系数偏低、容易发生褐变和玻璃化苗、生根率低等问题。说明原方法对二十年生木荷大树进行组织培养的关键技术环节有明显缺陷。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种适合木荷大树的高效离体组培快繁方法，为优良品种选育、良种规模化繁殖提供技术支撑。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种二十年生木荷大树的高效离体繁殖方法，按下列步骤进行：

(1)：准备基本培养基

每升基本培养基中含有：四水硝酸钙371-556mg，硝酸铵268-400mg，硫酸钾600-900mg，七水硫酸镁248-370mg，磷酸二氢钾115-170mg，二水氯化钙70-96mg，四水硫酸锰22.5mg，七水硫酸锌8.6mg，硼酸6.2mg，五水硫酸铜0.25mg，二水钼酸钠0.25mg，七水硫酸亚铁41.0mg，乙二胺四乙酸钠56.0mg，维生素B₁ 1.0mg，维生素B₆ 0.5mg，VB₅ 0.5mg，甘氨酸2.0mg，肌醇90mg，蔗糖20000mg，卡拉胶6500mg。

(2)：外植体的接种

采用经选育的二十年生木荷优良单株腋芽茎段为外植体，经70％酒精消毒20-30s，再用添加Tween-20 1-2滴/100ml的0.1％的升汞溶液消毒9-13min，用无菌水冲洗3-5次，作为外植体进行培养；

(3)：芽苗培养

在超净的工作台上，无菌条件下，将外植体接种在经消毒的含有启动培养基的培养瓶中，先将其置于黑暗条件下7-12d后，再置于普通日光灯为光源、光照强度为1500-2000lx下，每日光照16h，温度23-25℃、湿度为50％-60％，培养40d，分化长成试管芽苗。

所述的启动培养基由以下重量含量的原料组成：

每升基本培养基含：

玉米素(ZT)0.5-1.5mg；

6-苄基嘌呤(BA)1.0-2.5mg；

吲哚丁酸(IBA)0.01-0.1mg；

(4)：增殖培养

将上述(2)步中长成的芽苗，剪切转接于经消毒的含有增殖培养基的培养瓶中进行增殖培养，不断增殖，视繁殖规模达1000瓶进入下一步。

所述的增殖培养基为：

每升基本培养基含：

玉米素(ZT)1.0-1.5mg；

6-苄基嘌呤1.5-2.5mg；

吲哚丁酸(IBA)0.01-0.05mg；

柠檬酸(Citric acid)80-100mg；

(5)：壮苗培养

将(3)中培养的试管芽苗，剪切接种于经消毒的含有壮苗培养基的培养瓶中进行壮苗培养，32d后进入下一步。

所述的壮苗培养基为：

每升基本培养基含：