[发明专利]大曲酒窖泥微生物总DNA提取的前处理方法无效
| 申请号： | 201210107413.0 | 申请日： | 2012-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN102643798A | 公开（公告）日： | 2012-08-22 |
| 发明（设计）人： | 陈强;熊亚;唐玉明;吴英英;赵珂;陈翠平;徐勇;刘汉军;王强锋;任道群 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种大曲酒窖泥微生物总DNA提取的前处理方法，包括以下步骤：(1)称取适量窖泥，放入灭菌的离心管中，加入灭菌生理盐水，充分振荡，离心，弃去上清液；同法重复洗涤样品1次；(2)向上述样品加入无水乙醇，充分振荡，离心，弃去上清液；同法重复洗涤样品1次；(3)加入无菌超纯水，混合均匀，振荡洗涤样品，离心，弃去上清液；(4)将充分洗涤的窖泥样品用双层灭菌纱布包裹离心管口，-70℃冷冻30min，低温真空抽干至粉状，保存于-20℃冰箱，用于提取窖泥微生物总DNA。本发明处理方法简单，所需试剂少，可有效除去窖泥中乙酸乙酯、己酸乙酯、酒精等酯类、醇及其他有机酸，提取窖泥微生物总DNA效果好，效率高，其大小为23.1Kb左右。 | ||
| 搜索关键词： | 大曲 酒窖 微生物 dna 提取 处理 方法 | ||
【主权项】：
一种大曲酒窖泥微生物总DNA提取的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)称取适量窖泥，放入灭菌的离心管中，加入灭菌生理盐水，按照质量百分比计，生理盐水含0.4％‑0.6％吐温‑80，充分振荡3‑5min，4℃，9000r/min离心12min，弃去上清液；同法洗涤样品2次；(2)向上述样品加入无水乙醇，充分振荡3‑5min洗涤样品，4℃，9000rpm离心12min，弃去上清液；同法洗涤样品2次；(3)加入无菌超纯水，混合均匀，振荡3‑5min，洗涤样品，4℃，9000rpm离心12min，弃去上清液；(4)将充分洗涤的窖泥样品用双层灭菌纱布包裹离心管口，‑70℃冷冻30min，低温真空抽干至粉状，保存于‑20℃冰箱，用于提取窖泥微生物总DNA；所述步骤(1)‑(3)中，洗涤用灭菌生理盐水、无水乙醇、无菌超纯水加入量，按窖泥与溶液的重量体积比1∶1‑2添加。
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