[发明专利]成年小鼠神经元的机械分离方法

摘要

本发明涉及生物医学领域，公开了一种成年小鼠神经元的机械分离方法，方法如下：在冰浴组织培养液中采用电子振动切片机制作350-375m厚的成年小鼠脑组织切片，室温条件下保存30-60分钟，于无菌条件下，将脑组织切片放入含有木瓜蛋白酶的组织培养液中，控制温度为32.2-35.3℃，保存30分钟，将脑切片置于盛有HEPES缓冲液的细胞培养皿内，选择所需分离的神经区域，使用细胞分离器分离神经元；筛选健康神经元；本发明通过将原代培养的化学分离方法融入到机械细胞分离中，将脑切片预先用木瓜蛋白酶处理，使中年及老年小鼠的健康神经元可以通过机械分离得到，本方法简单方便，分离效果显著。

主权项

一种成年小鼠神经元的机械分离方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤a：在冰浴组织培养液中采用电子振动切片机制作350‑375m厚的成年小鼠脑组织切片，室温条件下保存30‑60分钟，备用；步骤b：于无菌条件下，将步骤a中的脑组织切片放入含有木瓜蛋白酶的组织培养液中，控制温度为32.2‑35.3℃，保存30分钟，备用； 步骤c：将脑切片置于盛有HEPES缓冲液的细胞培养皿内，选择所需分离的神经区域，使用细胞分离器分离神经元，频率为50‑60Hz，摆动幅度2‑4mm，分离针移动速度0.8‑1.5mm/s；步骤d：筛选健康神经元；筛选标准为：1）细胞轮廓光滑；2）在显微镜倒置光源下，透亮；3）有突触。