[发明专利]成年小鼠神经元的机械分离方法

权利要求书

1.一种成年小鼠神经元的机械分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤a：在冰浴组织培养液中采用电子振动切片机制作350-375m厚的成年小鼠脑组织切片，室温条件下保存30-60分钟，备用；

步骤b：于无菌条件下，将步骤a中的脑组织切片放入含有木瓜蛋白酶的组织培养液中，控制温度为32.2-35.3℃，保存30分钟，备用； 

步骤c：将脑切片置于盛有HEPES缓冲液的细胞培养皿内，选择所需分离的神经区域，使用细胞分离器分离神经元，频率为50-60Hz，摆动幅度2-4mm，分离针移动速度0.8-1.5mm/s；

步骤d：筛选健康神经元；筛选标准为：1）细胞轮廓光滑；2）在显微镜倒置光源下，透亮；3）有突触。

2.根据权利要求1所述的成年小鼠神经元的机械分离方法，其特征在于：所述的组织培养液中各成分的最终浓度：125.0mM NaCl、5.0mM KCl、1.24mM KH₂PO₄、26.0 mM NaHCO₃、2.4 mM CaCl₂、1.3 mM MgSO₄、10.0 mM葡萄糖；控制用量为150-200ml每只小鼠。

3.根据权利要求1所述的成年小鼠神经元的机械分离方法，其特征在于：所述的HEPES缓冲液中各成分的最终浓度：150mM NaCl、5.0mM KCl、2.0mM CaCl₂、1.0mM MgCl₂、10.0mM Hepes、10.0mM D-葡萄糖；控制用量为每片脑组织切片2.5-3.3ml。

4.根据权利要求1所述的成年小鼠神经元的机械分离方法，其特征在于：所述的组织培养液中的木瓜蛋白酶的含量为18U/ml。