[发明专利]哈氏噬纤维菌的电转化方法

摘要

本发明涉及一种电转化方法，步骤如下：(1)制备外源DNA质粒；(2)配制含有MgCl2和甘油的水溶液，将上述水溶液置于冰浴中，制得电击缓冲液；(3)将菌种保藏号为ATCCNO.33406的哈氏噬纤维菌菌体制备感受态细胞；(4)电击，然后转入液体培养基TY2复苏培养，在含有红霉素的固体平板培养基TY2上筛选转化子，制得电转化后的哈氏噬纤维菌。

主权项

一种哈氏噬纤维菌的电转化方法，其特征在于，步骤如下：(1)制备外源DNA质粒，获得浓度大于40μg/ml的重组质粒溶液；(2)配制含有MgCl2和甘油的水溶液，MgCl2的终浓度为8mM，甘油体积占溶液总体积的10％，将上述水溶液置于冰浴中，制得电击缓冲液；(3)将菌种保藏号为ATCC NO.33406的哈氏噬纤维菌菌体在液体培养基TY2中培养活化，170rpm，30℃培养35‑50h，再转接TY2液体培养基中培养，170rpm，30℃培养35‑50h，然后，离心收集细胞；用预冷的无菌水洗涤重悬细胞，离心；再用步骤(2)制得的电击缓冲液洗涤重悬细胞1‑2次，离心；最后用电击缓冲液重悬细胞，制得感受态细胞；(4)将步骤(3)制得的感受态细胞在14KV/cm、400Ω、25μF的条件下电击4‑6ms，然后转入液体培养基TY2，170rpm，30℃复苏培养12‑16小时，在含有30μg/ml红霉素的固体平板培养基TY2上筛选转化子，制得电转化后的哈氏噬纤维菌。