[发明专利]哈氏噬纤维菌的电转化方法

权利要求书

1.一种哈氏噬纤维菌的电转化方法，其特征在于，步骤如下：

(1)制备外源DNA质粒，获得浓度大于40μg/ml的重组质粒溶液；

(2)配制含有MgCl₂和甘油的水溶液，MgCl₂的终浓度为8mM，甘油体积占溶液总体积的10％，将上述水溶液置于冰浴中，制得电击缓冲液；

(3)将菌种保藏号为ATCC NO.33406的哈氏噬纤维菌菌体在液体培养基TY2中培养活化，170rpm，30℃培养35-50h，再转接TY2液体培养基中培养，170rpm，30℃培养35-50h，然后，离心收集细胞；用预冷的无菌水洗涤重悬细胞，离心；再用步骤(2)制得的电击缓冲液洗涤重悬细胞1-2次，离心；最后用电击缓冲液重悬细胞，制得感受态细胞；

(4)将步骤(3)制得的感受态细胞在14KV/cm、400Ω、25μF的条件下电击4-6ms，然后转入液体培养基TY2，170rpm，30℃复苏培养12-16小时，在含有30μg/ml红霉素的固体平板培养基TY2上筛选转化子，制得电转化后的哈氏噬纤维菌。

2.如权利要求1所述的电转化方法，其特征在于，所述步骤(1)中的外源DNA质粒为质粒pEP4351。

3.如权利要求1所述的电转化方法，其特征在于，所述步骤(3)和步骤(4)中的液体培养基TY2，每升组分如下：

蛋白胨：2g，酵母浸出物：0.5g，葡萄糖：2g，纯水定容至1L，pH 7.2；高压蒸汽灭菌。

4.如权利要求1所述的电转化方法，其特征在于，所述步骤(3)的离心条件为：4℃、7000rpm、5min。

5.如权利要求1所述的电转化方法，其特征在于，所述步骤(3)的转接量为1％(v/v)；培养时间为40h；最后用100-200倍的电击缓冲液重悬细胞，-70℃冻存。

6.如权利要求1所述的电转化方法，其特征在于，所述步骤(4)中液体培养基TY2的温度为30℃。

7.如权利要求1所述的电转化方法，其特征在于，所述步骤(4)中固体平板培养基TY2，每升组分如下：

蛋白胨：2g，酵母浸出物：0.5g，葡萄糖：2g，琼脂：10g，纯水定容至1L，pH 7.2；高压蒸汽灭菌。